Что означает олигоастенотератозооспермия: Олигоастенотератозооспермия: диагностика и лечение в СПб

Содержание

Олигоастенотератозооспермия: диагностика и лечение в СПб


Олигоастенотератозооспермия или ОАТ-синдром – одна из форм мужского бесплодия. Эту комбинированную патологию не всегда удается успешно скорректировать. Поэтому лечение олигоастенотератозооспермии и обусловленного ею бесплодия нередко требует использования ЭКО и других вспомогательных репродуктивных технологий.


Что это за состояние


Олигоастенотератозооспермия – это комбинированная патология спермы, которая включает одновременно 3 вида нарушений:

  • Олигоспермия, когда в эякуляте содержится малое количество сперматозоидов. Состояние диагностируют при их концентрации 15 млн и ниже.
  • Тератозооспермия, характеризующаяся увеличением числа морфологически неполноценных спермиев значительно выше допустимой нормы в 50%. Диагноз выставляется при индексе тератозооспермии более 1,6 и увеличении числа патологических форм клеток выше 96% (согласно критериям Крюгера).
  • Астенозооспермия – увеличение в эякуляте количества сперматозоидов со недостаточной двигательной активностью. Оценивается общая подвижность спермиев и процент прогрессивно-подвижных клеток.


ОАТ-синдром может иметь разную степень выраженности. Это имеет прогностическое значение и влияет на выбор предпочтительной лечебной тактики.


Что может приводить к такой проблеме


Причин для формирования такой комбинированной патологии спермы достаточно много. Это могут быть любые факторы, которые влияют на сперматогенез (процесс образования и созревания мужских половых клеток) и на прохождение сперматозоидов по половым протокам.


К самым частым причинам относят:

  • Эндокринные расстройства, приводящие к гипогонадизму – снижению уровня тестостерона. Это могут быть нарушения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, патология на уровне яичек, гипотиреоз, сахарный диабет.
  • Инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовой системы (в том числе ЗППП). Они приводят к повреждению сперматогенной ткани яичек, частичной непроходимости (обтурации) семявыносящих путей или к поражению простаты.
  • Варикоцеле.
  • Генетическая патология.
  • Токсические факторы: алкоголизация, курение, регулярный контакт на рабочем месте с разнообразными веществами, проживание в неблагоприятных экологических условиях, длительный прием некоторых препаратов.
  • Хронические соматические заболевания, протекающие с частыми обострениями, вне стойкой компенсации.
  • Стрессы, переутомление, невротические расстройства.


В некоторых случаях причина заболевания остается невыясненной, обследование не выявляет клинически значимых отклонений. В этом случае говорят об идиопатической форме.


Как это проявляется


Диагноз олигоастенотератозооспермия нередко становится неожиданностью для мужчины. Ведь во многих случаях имеющиеся изменения ограничиваются только низким качеством спермы и не влияют на его самочувствие, интимную жизнь и половую идентификацию. Визуальных изменений спермы обычно нет.


Ключевое проявление заболевания – супружеское бесплодие. Другие имеющиеся у мужчины симптомы обычно обусловлены не этой патологий, а первопричиной проблемы.


Диагностика ОАТ-синдрома включает:

  1. Спермограмму для уточнения характера отклонений. Оценка должна проводиться в соответствии с современными критериями Крюгера. Желательно сдать анализ несколько раз, для получения достоверных данных.
  2. Комплексное обследование для определения возможных причин бесплодия. Назначаются анализы на ЗППП и другие инфекции, УЗИ мошонки, простаты и органов малого таза, комплекс анализов для уточнения гормонального статуса, MAR-тест. При необходимости проводятся и другие исследования, программа диагностики составляется индивидуально.


ОАТ-синдром может стать случайной диагностической находкой, если мужчина сдает спермограмму для подготовки к донорству или если пара осознанно готовится к зачатию. Причем факт наступления в прошлом от него беременности не является критерием исключения. Поэтому в бесплодных семьях обследованию подлежат оба супруга, даже если мужчина уже имеет здоровых детей.


Можно ли забеременеть при такой проблеме


Олигоастенотератозооспермия – серьезная и прогностически непростая патология, но не это не означает стерильность мужчины с полным супружеским бесплодием. Беременность с таким диагнозом возможна, хотя большинству пар для этого требуется помощь грамотного репродуктолога.


При ОАТ-синдроме вероятность самостоятельного (естественного) зачатия очень невелика, особенно при тяжелой степени заболевания и при наличии сопутствующих нарушений у женщины. Поэтому лечение бесплодия при олигоастенотератозооспермии нередко проводится с использованием современных вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Причем в некоторых случаях решение о целесообразности ЭКО принимается сразу, что зависит от возраста супругов и выраженности проблемы.


Олигоастенозооспермия и беременность – это не взаимоисключающие понятия. Но для достижения желанного результата необходимо лечить заболевание у грамотного специалиста, а не пускать ситуацию на самотек.


Лечение олигоастенотератозооспермии – это в первую очередь лечение бесплодия. Поэтому основные мероприятия направлены на улучшение качества спермы и проводятся в период подготовки к зачатию. Если выявленные изменения не представляют опасности для здоровья мужчины и пара не планирует в ближайшее время забеременеть, лечение может быть отложено.


Как лечат ОАТ-синдром. Основные принципы


Лечебная тактика при такой комбинированной патологии спермы зависит от ряда факторов и определяется индивидуально. При этом врач учитывает причины заболевания, выраженность нарушений, наличие и характер репродуктивных расстройств у женщины, возраст супругов, личные предпочтения пациента.


Возможно несколько подходов при лечении этой формы мужского бесплодия:

  • Устранение наиболее вероятных причин патологии спермы, для чего могут быть использованы консервативные и хирургические методики. Через 2–3 месяца после этого пациент сдает контрольную спермограмму, пара предпринимает попытки самостоятельного зачатия. При их безуспешности назначают стимулирующую терапию и решают вопрос о целесообразности ЭКО.
  • Устранение основных причин и проведение протокола стимуляции сперматогенеза. Улучшение показателей спермограммы дает возможность попытаться зачать ребенка естественным путем. Желательно также в этот период сдать сперматозоиды для криоконсервации. Если беременность не наступила в течение 1–3 месяцев, рекомендуется использовать ВРТ.
  • Проведение ЭКО сразу после лечения и стимуляции сперматогенеза.


При лечении ОАТ-синдрома важнее достичь не увеличения количества сперматозоидов, а повысить их фертильность (оплодотворяющую способность) со снижением доли морфологически аномальных клеток. Это снизит риск патологии беременности и аномалий плода при самостоятельном или индуцированном зачатии. А при использовании вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) облегчит врачу задачу при отборе спермиев для ЭКО.


Как преодолеть бесплодие


Лечение олигоастенотератозооспермии и обусловленного ею бесплодия может включать:

  • Прием препаратов, улучшающих функциональное состояние яичек и благотворно влияющих на сперматогенез.
  • Устранение инфекционно-воспалительных процессов в мочеполовой системе. Для этого могут быть назначены антибиотики, противовоспалительные средства, а после ликвидации инфекции – физиотерапия.
  • Медикаментозную коррекцию эндокринных нарушений. При гипогонадизме подбирается заместительная гормональная терапия.
  • Хирургическое устранение варикоцеле.
  • Операции по восстановлению проходимости семявыносящих путей. Хирургическое лечение заболевания может потребовать удаления опухолей и опухолевидных образований мошонки, наложения анастомозов (искусственных соединений между отдельными частями протоков) и проведения других вмешательств.
  • Использование вспомогательных репродуктивных технологий. Наиболее востребованы протоколы ЭКО, ЭКО+ИКСИ, ЭКО с ПГД. При необходимости применяются и крио-протоколы, когда в оплодотворении участвуют полученные после стимуляции и замороженные сперматозоиды пациента.


Повторные безуспешные попытки ЭКО (особенно если не удается получить пригодных для подсадки эмбрионов) – повод задуматься об использовании донорских сперматозоидов.


Где лечат такое бесплодие


Преодоление олигоастенотератозооспермии и других форм бесплодия – непростая задача, требующая подчас многоэтапного комплексного обследования и тщательно подбора лечения. Поэтому парам, столкнувшимся с проблемами при естественном зачатии, целесообразно обратиться в профильный хорошо оснащенный медицинский центр.


Клиника репродуктивной медицины ICLINIC в СПб специализируется на диагностике и лечении различных форм супружеского бесплодия. Наши врачи руководствуются современными международными критериями и рекомендациями, используют высокорезультативные методики и эффективные проверенные технологии.


Оснащение клиники и квалификация специалистов позволяет проводить все необходимые лечебно-диагностические процедуры. Наши пациенты имеют возможность полностью пройти рекомендованное обследование или предоставить уже имеющиеся результаты, своевременно осуществлять контроль лечения и не терять время на поиск нужного врача.


Для преодоления бесплодия в нашей клинике практикуется комплексный подход, широко применяются современные лечебные схемы и вспомогательные репродуктивные технологии. По эффективности проведенных в 2016 и 2017 гг. ЭКО ICLINIC заняла первое место среди других репродуктивных клиник СПб и ЛО.


Мы успешно справляемся даже с тяжелыми и комбинированными формами бесплодия, давая супружеским парам долгожданную возможность стать родителями.

диагноз, лечение и естественная беременность

Что такое Олигоастенотератозооспермия у мужчин?

Олигоастенотератозооспермия (ОАТ) — это сочетание 3-х патоспермии одновременно:

  • Олигоспермия — малое количество сперматозоидов
  • Астеноспермия — сперматозоиды малоподвижны
  • Тератозооспермия — плохая морфология сперматозоидов

Если по результатам спермограммы вы получили заключение Олигоастенотератозооспермия, запишитесь на приём к андрологу. Время и возраст — это важнейший фактор в лечении бесплодия. Врач назначит схему коррекции сперматогенеза. Лечение может занять от 2 до 6 месяцев. В процессе коррекции необходимо будет повторить анализ спермы для контроля за лечением. 

Симптомы ОАТ

Нет никаких специфических симптомов. Обычно, если пара безуспешно пытается забеременеть в течении 1 года (т.е. ведет регулярную половую жизнь и не пользуется никакими методами контрацепции), мужчине назначают спермограмму — первичный анализ для оценки фертильности эякулята, а параллельное обследование женщины показывает, что она здорова. Так мужчина узнает о существовании у него Олигоастенотератозооспермии.

В результатах спермограмы обнаруживается, что сперматозоидов очень мало, они плохо двигаются и имеют неправильную форму.

Причины ОАТ

Олигоастенотератозооспермия — это сочетание сразу нескольких нарушений, поэтому и причины, вызвавшие это состояние могут быть сочетанными. К сожалению, только в 10-20%  случаев врачу удается определить все причины ОАТ. Чаще всего указывают идиопатическую ОАТ, т.е. причины остаются невыясненными. Однако, это не делает мужчину неизлечимо бесплодным.

Все факторы, вызывающие Олигоастенотератозооспермию можно разделить на 4 большие группы: генетические, образ жизни, функция производства сперматозоидов и функция доставки сперматозоидов в эякулят. 

 

Большинство генетических нарушений не поддаются коррекции. В этом случае показаны методы ВРТ (ЭКО). Что такое генетические нарушения? Это дефекты Y-хромосомы или синдром Клайнфелтера.

 

Образ жизни, а точнее устоявшиеся привычки, которые негативно влияют на качество спермы. 

Курение снижает количество сперматозоидов на 23%, а подвижность на 13%.

Алкоголь (5 раз в неделю) снижает уровень тестостерона. Многие наркотические средства имеют сходный эффект. 

Ожирение (Индекс массы тела более 30) вызывает у мужчины гормональные изменения, которые отражаются на сперматогенезе. Недостаточный вес (ИМТ ниже 18,5) тоже вызывает проблемы.  

Езда на велосипеде или верховая езда. Механическое воздействие и повышение температуры мошонки угнетают выработку сперматозоидов.

Регулярное перегревание яичек. Горячий душ или ванна, баня и ношение узкого обтягивающего белья вызывает губительный для сперматозоидов перегрев. 

Лекарства могут по-разному влиять на качество спермы. Особенно часто на количество и подвижность. Поэтому важно рассказать врачу не только о перенесенных или хронических заболеваниях мочеполового тракта. Перечислите все лекарства, которые принимаете постоянно или последние 2-3 месяца. 

 

Функция производства (выработки) сперматозоидов. Сперматозоидов может быть недостаточно по нескольким причинам. Не все из них поддаются коррекции. 

Возраст. Выработка сперматозоидов снижается с возрастом.

Гормональный дисбаланс. При определенных гормональных нарушениях, сперматогенез может нарушаться. Хорошая новость заключается в том, что часто сперматогенез можно временно стимулировать. Временно — значит до появления сперматозоидов, способных оплодотворить яйцеклетку самостоятельно или с использованием вспомогательных репродуктивных технологий. Когда прием гормональных средств прекратится, сперматогенез тоже остановится.  

Травмы яичка (включая хирургию половых органов)

Перенесенные в прошлом инфекции (есть инфекции, поражающие репродуктивную функцию, есть эффект от неправильного или несвоевременного лечения)

Варикоцеле. Застой крови, т.е. нарушение циркуляции внутри яичка вызывает локальное повышение температуры и может останавливать или сильно сокращать производство сперматозоидов.

Онкологические заболевания яичек, а так же химиотерапия и лучевая терапия при других онкологических болезнях. 

 

Функция доставки спермы в яэкулят. Любые нарушения связанные с течением спермы и эякуляцией. 

Обструкция семявыносящих протоков. Чтобы смешаться с семенной плазмой, сперматозоиды должны пройти путь по семявыносящим протокам. Если есть дефекты протоков, то сперматозоиды не могут пройти и погибают.

Простатит

Ретроградная эякуляция. Состояние при котором эякулят не выходит наружу, а направляется в мочевой пузырь.

Эректильная дисфункция. Как правило, если у мужчины нет эрекции, нет и эякуляции. Эректильную дисфункцию можно лечить с помощью таблеток, инъекций и протезирования полового члена.

К сожалению, олигоастенотератозооспермия очень распространена. До 30% мужчин, страдающих от бесплодия имеют диагноз идиопатическая олигоастенотератозооспермия. Т.е. причины возникновения этого состояния у них мужчин не выяснены.

Если причину удается установить, то это может быть:

  • Варикоцеле. Расширение вен яичка и семенного канатика.
  • Лекарства. Стероиды, таблетки от повышенного артериального давления, антидепрессанты или химиотерапия.
  • Гормональные изменения, вызванные ожирением. (ИМТ > 30)
  • Курение и алкоголь. Курение может снизить количество сперматозоидов на 23%, а подвижность сперматозоидов — на 13%. Регулярное употребление алкоголя (> 5 раз в неделю) значительно снижает количество тестостерона и ухудшает качество спермы.

Лечение Олигоастенотератозооспермии

Если причина ОАТ известна, то лечение сфокусировано именно на причине.

При варикоцеле проводят операцию и удаляют расширенные вены. Ток крови нормализуется и в области мошонки перестает держаться повышенная температура. Сперматогенез восстанавливается в течении нескольких месяцев после операции.

 

Тактика лечения олигоастенотератозооспермии в первую очередь отталкивается от причины. Но поскольку лишь в 10-20% случаев удается определить причину, и применить специфическое лечение, для всех остальных случаев существуют общие рекомендации по улучшению качества сперматозоидов. 

 

Вы должны понимать, что общие рекомендации — это не безысходность. Это не ситуация, когда врач ничего не может вам предложить. Сперма очень подвержена влиянию внешних и внутренних факторов. И тактика общих рекомендаций это именно такое , только контролируемое влияние.

Если причина остается невыясненной, и нет ответа на общее лечение, то паре рекомендовано только ИКСИ.

что это у мужчин, лечение, причины, шансы на естественную беременность

Спермограмма с морфологией + MAR-тесты

Цена 3700 руб

Имуноглобулины IgG, IgA в одном тесте

Адрес лаборатории: Москва, ул. Беговая, д. 7 стр. 2

Запись по телефону: +7 (495) 772-13-20

Что такое олигоастенотератозооспермия?

Олигоастенотератозооспермия, также называемая ОАТ-синдром, — это сложная комплексная патология, объединяющая несколько видов изменений в сперме:

  • олигозооспермия — для нее характерна низкая концентрация жизнеспособных сперматозоидов менее 15 млн/мл;
  • астенозооспермия — выражается в низкой подвижности половых клеток, менее 32 % сперматозоидов с прогрессивной подвижностью;
  • тератозооспермия — патология, при которой в сперме обнаруживаются сперматозоиды с морфологией, отличной от идеальной, в количестве более 4 %.

Симптомы патологии

Как и большинство видов патологий спермы, ОАТ протекает бессимптомно. Основным признаком является отсутствие наступления беременности у пары, которая ведет регулярную половую жизнь, не прибегая ни к каким методам контрацепции. Следует отметить, что нарушения в состоянии спермы не отражаются на сексуальной активности мужчины. Часто случается, что одни мужчины, ведущие активную половую жизнь, имеют проблемы с зачатием, в то время как другие, не уделяющие этому занятию особого внимания, обладают высокой фертильностью.

Пара, которая не может забеременеть в течение продолжительного времени, более года, проходит обследование у специалистов. Для оценки фертильности мужчине назначается спермограмма, по результатам которой может быть диагностирован ОАТ-синдром.

Причины возникновения

Как уже было замечено выше, ОАТ — заболевание комплексное, поэтому причины возникновения олигоастенотератозооспермии могут быть самыми разными.

Выделяют основные группы факторов возникновения патологии:

  • генетические;
  • социальные;
  • эндокринные;
  • нарушения сперматогенеза и функции доставки сперматозоидов в семенную жидкость.

Генетические мутации редко поддаются полной коррекции. Но даже в этом случае ситуация не является безнадежной. Парам, которым поставлен диагноз ОАТ-синдром, показано применение процедур вспомогательных репродуктивных технологий — ЭКО и ИКСИ. То есть даже при наличии дефектов Y-хромосомы пара может зачать генетически своего ребенка.

К социальным причинам относят особенности образа жизни, которые могут негативно повлиять на состояние спермы:

  • курение табака, злоупотребление алкоголем, прием наркотических и психотропных веществ снижают уровень тестостерона, уменьшают количество сперматозоидов на 23 %, а их подвижность на 13 %;
  • выходящий за пределы нормы индекс массы тела (ИМТ). Об ожирении говорят, когда ИМТ возрастает выше 30, а о недостатке веса, когда ИМТ ниже 18,5;
  • чрезмерное увлечение велоспортом или верховой ездой ведет к перегреву мошонки;
  • регулярный перегрев, в том числе увлечение баней или сауной;
  • прием лекарственных препаратов — стероидов, средств для снижения артериального давления, антидепрессантов, прохождение курса химиотерапии;
  • вредные условия труда, неблагоприятная экологическая обстановка;
  • длительные психоэмоциональные стрессы.

К нарушениям выработки сперматозоидов относят:

  • солидный возраст пациента. С возрастом количество вырабатываемых сперматозоидов снижается;
  • гормональные сбои. В этой ситуации сперматогенез можно стимулировать до появления необходимого количества сперматозоидов достаточного для естественного или искусственного оплодотворения;
  • травмы и хирургические операции на внешних половых органах;
  • перенесенные инфекции;
  • варикозное расширение вен гроздьевидного сплетения в мошонке — варикоцеле;
  • онкологические заболевания, в том числе органов репродуктивной системы.

Препятствия при доставке сперматозоидов в эякулят:

  • обструкция семывыводящих путей;
  • простатит;
  • эректильная дисфункция;
  • ретроградная эякуляция.

Примерно в 30 % случаев причину возникновения олигоастенозооспермии установить не удается. В этом случае говорят об идиопатическом, то есть невыясненном характере заболевания.

Диагностика

Основным и самым информативным способом диагностирования ОАТ-синдрома является качественная спермограмма. Для получения достоверных данных рекомендуется проводить ее два или три раза с интервалом в 2–3 недели, чтобы захватить разные стадии сперматогенеза.

К сдаче спермограммы необходимо тщательно подготовиться: соблюдать половой покой в течение 2–3 дней до сдачи анализов при олигоастенотератозооспермии, избегать стрессовых ситуаций и физических перегрузок, прекратить прием лекарственных препаратов, кроме назначенных по жизненным показаниям. После перенесенного воспалительного или инфекционного заболевания необходимо выдержать интервал в 2–3 недели перед сдачей анализа.

Олиготератозооспермия: можно ли забеременеть?

Если мужчине диагностируется синдром ОАТ, то вероятность наступления естественной беременности ничтожно мала, даже при условии полного репродуктивного здоровья у партнерши.

Способы лечения

Методика лечения олигоастенотератозооспермии направлена на устранение причин его вызвавших.

  • При варикоцеле показано хирургическое вмешательство, сперматогенез полностью восстанавливается в течение 2–3 месяцев.
  • При простатите хорошие результаты показывает антибактериальная и противовоспалительная терапия.
  • Антиоксидантные препараты применяют при нарушениях ДНК.

Для профилактики олигоастенотератозооспермии достаточно упорядочить образ жизни, полноценно и сбалансированно питаться, избегать стрессовых ситуаций и физических перегрузок, устранить негативные факторы среды.

В случае недостаточной эффективности консервативного лечения рекомендовано проведение процедур ВРТ — ЭКО или ИКСИ. К ним рекомендуется прибегать и в случае тяжелых и осложненных форм ОАТ.

О лаборатории

Профессиональная лаборатория спермиологии
Большой опыт и профессионализм, наличие собственной сертифицированной лаборатории, анализы экспертного уровня.
Услуги и цены

Адреса:
125284, Москва, ул. Беговая, д. 7 стр. 2

Часы работы лаборатории:
Пн — Пт 08:00-20:00
Сб — Вс 09:00-15:00

 

лечить или ЭКО? Морфология по Крюгеру.

Олигоастенотератозооспермия что это такое?  Можно ли вылечить, или это прямое показание к  ЭКО? Отвечает Игорь Иванович Гузов, акушер-гинеколог, к. м.н., основатель Центра иммунологии и репродукции.

Вопрос: «Диагностирована олигоастенотератозооспермия, 1% по Крюгеру. Есть ли смысл лечить, или сразу на ЭКО + ИКСИ?»

Очень частый вопрос. Здесь я хотел бы сказать следующее, что такое морфология по Крюгеру? Это морфология по строгим критериям. Сперматозоиды образуются у мужчины совершенно в гигантском  количестве. Если у мужчины где-то, допустим,  20-40 миллионов сперматозоидов в 1 миллилитре или 2,5 кубика, то тогда получается, что если брать порцию эякулята, то там уже количество сперматозоидов может идти на сотни миллионов.

А если брать регулярную половую жизнь, то в период предшествующий овуляции, внутрь организма женщины могут поступать чуть ли не миллиарды сперматозоидов. А для оплодотворения нужен всего лишь 1 сперматозоид.

И понятно, что когда наступает процесс оплодотворения, к яйцеклетке прорывается только несколько десятков или сотен сперматозоидов из всего того количества, которое поступило в организм женщины. Поэтому там есть из чего выбирать. Если брать 1%, то посчитайте сколько здесь всего получается сперматозоидов.

Поэтому когда мы оцениваем спермограмму, мы смотрим на 3  базовых статистических показателя. Это общая концентрация сперматозоидов, и у Вас поставили диагноз олигозооспермия, то есть возможно, что снижено количество сперматозоидов. Дальше оценивается подвижность сперматозоидов, если она снижена, то ставится диагноз астенозооспермия. И дальше оценивается морфология: сперматозоид имеет головку, шейку и хвостик. Это видит врач лаборант, когда оценивает спермограмму под микроскопом. И когда не используются крюгеровские критерии, то тогда — если сперматозоид выглядит правильным образом: нет грубых нарушений строения головки, шейки или хвостика — он считается нормальным.

Нормы, которые принимаются различными международными организациями, постоянно меняются. Условно, если брать не по Крюгеру, считается, что 30% это нормально. То есть, если 30% с нормальной морфологией. А что такое по Крюгеру? А по Крюгеру получается, что мы должны измерить головку, шейку, хвостик, и сперматозоид должен не только  подходить по внешним критериям. Внешне вроде бы он хороший, но так же должен подходить по стандартам всех размеров. И  тогда, все эти вот промежуточные формы, которые вроде бы внешне хорошие, начинают отсекаться. И получается, что 4% по Крюгеру — это норма для спермограммы. И если идет снижение, то кажется, что 1% —  это тяжело, но если брать по Крюгеру, то не всегда при этом бывает снижена фертильность.

Поэтому, когда мы сталкиваемся с такой ситуацией, всегда важно исходить из комплекса  оценки.  Проводилось ли лечение? Иногда бывает такая ситуация, что человек был перегружен на работе, переболел каким-то  заболеванием, были хронические стрессы, было хроническое недосыпание, частые командировки, серьезные волнения, переживания и так далее… Всё это может отражаться на спермограмме. И поэтому показатели спермограммы могут быть очень подвижными и могут меняться в зависимости от функционального состояния мужчины.

Очень часто бывает так, что назначение лечения приводит к тому, что все начинает улучшаться,  особенно если причина нарушений была обнаружена. Либо же иногда бывает такая ситуация, что человек сдает спермограмму, а срок ненаступления беременности еще даже не достигает 1 года, ну, допустим, 5-6 месяцев. Пришли, сдали спермограмму, и если есть какие-то отклонения в спермограмме, ставится диагноз, и сразу говорят : «Идите на ЭКО.» Всегда важно попытаться провести лечение, попытаться разобраться во всех составляющих, которые могут мешать наступлению беременности. Тогда, возможно, что такой необходимости и не будет. Но иногда бывают такие ситуации, допустим, люди не беременели, не обследовались, начали планировать беременность, у жены возраст уже идет далеко за 35 лет, мало времени – тогда, возможно, это нужно оценивать. Всё очень индивидуально оценивается, но когда человек сдал спермограмму, и ему говорят: «Всё, бегите сразу на ЭКО», а там и возраст молодой,  и срок не наступления беременности маленький, и лечения никакого не проводилось — вот здесь очень часто бывает так, что вероятность наступления беременности может быть достаточно высокой при нормальном обследовании и лечении обоих супругов.

И мы говорили уже неоднократно в нашем эфире по поводу такого показателя, который называется потенциал фертильности, если нам удается повысить потенциал фертильности супружеской пары, то иногда можно все-таки рассчитывать и на наступление беременности естественным путем.

Поэтому, конечно же, здесь я бы сказал так, что всегда нужно попытаться начать лечение, если возраст женщины позволяет, и если нет очень грубых и тяжелых отклонений.

И если возраст Вашей супруги меньше 35 лет, если срок не наступление беременности меньше полугода или где-то около года, и если не проводилось никакого лечения, и  это была только однократно сданная спермограмма, то лучше все-таки провести лечение, посмотреть динамику, и провести комплексное обследование супруги.

В этой связи вспоминается одна статья, которую я смотрел уже достаточно давно, но там получилось так, что где-то 80е или 90е годы было очень тяжелое разрушительное землетрясение в Японии, и там недалеко от эпицентра располагалась клиника, которая занималась лечением бесплодия. Пациенты, которые проходили обследование по бесплодию, сдали спермограммы в обычном порядке, а дальше произошло землетрясение, и врачи, которые работали в этой клинике, попросили этих же пациентов сдать спермограмму  после землетрясения.

Оказалось, у тех людей, которые находились очень близко к эпицентру, где разрушения были наиболее значимыми, и где их трясло по-настоящему, у них были очень тяжелые отклонения по спермограмме, которые постепенно восстанавливались. И чем ближе человек находился к эпицентру землетрясения, тем больше были отклонения по спермограмме.

Это исследование очень хорошо показало насколько стрессовый фактор может оказывать влияние на спермограмму. То есть она является фактором, отражающим состояние организма мужчины целом, и поэтому, если спермограмма сдана только вот в какой-то один случайный момент,  всегда важно просто посмотреть еще раз, параллельно обследуя супругу, параллельные ища эти факторы, параллельно назначая какое-то лечение. И посмотреть: будет улучшения или нет. Если улучшения нет, если беременность не наступает, безусловно, тогда затягивать ненужно, тогда, возможно, и нужно пойти на ЭКО.

К сожалению, мы часто видим такую ситуацию, когда пациент сдал единственный раз спермограмму, там обнаружили какие-то отклонения, которые потенциально лечатся, а им сразу говорят: «Идите на ЭКО, только оно вам поможет, что вы тянете, зачем обследуйтесь — вам это всё не нужно…» С этим согласиться нельзя ни в коем случае, всегда нужно помнить о том, что вот эти показатели, которые обеспечивают наступление беременности,  могут колебаться широком диапазоне, и всегда нужно оценивать именно потенциал фертильности супружеской пары.

В Центре иммунологии и репродукции Вы можете проконсультироваться по проблемам мужской репродуктивной системы, как с точки зрения естественного пути оплодотворения, так и использования методов вспомогательных репродуктивных технологий.

Нарушение сперматогенеза у мужчин — лечение и диагностика

Что такое сперматогенез?

Сперматогенез – формирование, развитие и созревание сперматозоидов в мужском организме. Сперматогенез очень чувствителен к внешним и внутренним влияниям. Негативные воздействия ухудшают качественные и количественные характеристики спермы. Как следствие – проблемы с зачатием. К счастью, сегодня врачи умеют преодолевать мужское бесплодие, вызванное патологиями спермы.

В центре «Линия жизни» созданы все условия для точной диагностики нарушений сперматогенеза и лечения мужского бесплодия. Над каждым случаем работает команда из репродуктолога, уролога-андролога и эмбриолога. Наши врачи делают счастливыми папами пациентов с самыми серьезными патологиями спермы.

Кратко про сперматогенез

Процесс запускается в мужском организме в период полового созревания, регулируется гормонами, в идеале продолжается до старости. Один цикл занимает примерно 73-75 дней. Каждый раз в семенных канальцах образуется многомиллионная армия сперматозоидов.

Мужские половые клетки вырабатываются под влиянием фолликулостимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего (ЛГ) гормонов. ЛГ стимулирует производство тестостерона, а ФСГ вместе с тестостероном влияет на сперматогенез.

Ошибочно считается, что если у мужчины все в порядке с половой жизнью, то и с качеством спермы тоже. А когда уже есть один ребенок, то в дальнейшем проблем с деторождением точно быть не должно. Между тем, почти половина случаев бесплодия в паре связана с мужским фактором, причиной которого обычно становится та или иная патология спермы. Что приводит к сбоям в сперматогенезе?

Факторы ухудшения сперматогенеза

Внутренние:

  • Низкий уровень ФСГ и/или ЛГ из-за недостаточности функции гипоталамуса или гипофиза.
  • Воспалительные процессы.
  • Врожденные аномалии репродуктивной системы.
  • Сбои в работе надпочечников и щитовидной железы.
  • Варикоцеле.
  • Водянка яичек, перекрут яичка.
  • Сахарный диабет.
  • Ожирение.
  • Паховые грыжи.

Внешние:

  • ЗППП и инфекции половых путей.
  • Травмы половых органов, сосудов.
  • Отравления организма химикатами, солями тяжелых металлов.
  • Курение и алкоголь.
  • Воздействие некоторых медицинских препаратов, включая химио или радио терапию.
  • Воздействие высоких температур.
  • Влияние радиации.
  • Дефицит питательных веществ, недостаточность питания.

Перечисленные факторы способны снизить концентрацию сперматозоидов, ухудшить их подвижность и морфологию. Концентрация, подвижность и морфология (структура) – главные характеристики, определяющие способность спермы к оплодотворению. 

Спермограмма — диагностика патологий спермы

Основным методом определения способности семенной жидкости к оплодотворению является спермограмма. Это исследование качественных и количественных характеристик спермы под микроскопом. Оно обязательно проводится, когда пара обращается за помощью к репродуктологу.

Именно спермограмма позволяет выявить патологические состояния спермы, если они есть у мужчины. О нарушениях можно говорить, когда какая-то характеристика отклоняется от нормы.

Основные показатели спермограммы. Нормы по ВОЗ:

  • Объем эякулята — 1,5 мл
  • Количество сперматозоидов — от 39 млн
  • Концентрация сперматозоидов— от 15 млн в 1 мл
  • Подвижных спермиев— от 40%
  • Сперматозоидов с прогрессивным движением — от 32%
  • Жизнеспособность — от 58%
  • Морфология, кол-во нормальных форм — от 4%

Если все показатели спермограммы в норме, в заключении говорится о нормоспермии. Если есть отклонения, прогноз специалиста зависит от их выраженности. При незначительно выраженном нарушении остается вероятность физиологического зачатия. Значительное угнетение той или иной характеристики позволяет предположить, что именно оно привело к бесплодию.

Важная информация

Одной спермограммы недостаточно для постановки диагноза. Исследование должны быть проведено как минимум дважды, с определенным временным интервалом. Пациенту необходимо ответственно подойти к сдаче спермы на анализ. Иначе велика вероятность недостоверного результата.

Правила подготовки к сдаче спермы
  • Вылечить воспалительные заболевания.
  • За 7 дней до сдачи отказаться от алкоголя и приема лекарств.
  • Неделю перед процедурой не посещать сауну и баню, не принимать горячие ванны.
  • Как минимум 3-4 дня перед процедурой (но не больше 6 дней) воздерживаться от половой жизни.
  • Курящим мужчинам отказаться от вредной привычки хотя на несколько часов до сдачи спермы.

Для достоверного результата многое требуется и от лаборатории, в которой исследуется эякулят. Специалист, делающий анализ, должен располагать точным микроскопом последнего поколения, современными материалами. Большое значение имеет его опыт в исследовании спермы.

Чтобы уточнить диагноз, назначаются дополнительные обследования: УЗИ, анализ крови на гормоны и др.

Виды нарушений сперматогенеза

Ухудшение каждого важного показателя считается отдельной патологией спермы. Приведем распространенные нарушения, которые часто приводят к мужскому бесплодию.

  1. Азооспермия. Отсутствие в эякуляте половых клеток, одна из самых тяжелых патологий спермы. Может быть секреторной (когда в яичках не происходит образования сперматозоидов) и обструктивной (когда спермии не попадают в эякулят из-за наличия препятствия в семявыводящих протоках). Полная информация об азооспермии, ее причинах, последствиях и способах лечения представлена здесь
  2. Астенозооспермия. Снижение показателей подвижности и скорости движения половых клеток. В зависимости от выраженности проблемы определяется степень азооспермии – 1, 2 или 3.
  3. Олигозооспермия. Концентрация сперматозоидов (количество в 1 миллилитре эякулята) ниже нормативного значения. Принято различать несколько степеней олигозооспермии.
  4. Тератозооспермия. Плохая морфология, количество сперматозоидов патологических форм в эякуляте выше нормативного значения. Спермограмма может показать, что у пациента имеется не одно изолированное нарушение сперматогенеза, а сочетание двух или даже трех. В таком случае название патологии складывается из нескольких:
  5. Астенотератозооспермия. Низкий показатель подвижности сперматозоидов сочетается с плохой морфологией.
  6. Олигоастенотератозооспермия. Низкая концентрация сперматозоидов в сочетании с нарушением их подвижности и плохой морфологией.

Лечение патологий сперматогенеза

Спектр методов лечения патологий спермы широк, выбор зависит от причины, которая привела к нарушению. Иногда достаточно просто устранить воздействие негативного фактора, изменить образ жизни.

Например, сперматогенез может восстановиться сам собой после прекращения контакта с химическими веществами, отмены соответствующих медицинских препаратов. Но чаще требуются более серьезных меры.

  • Медикаментозная терапия инфекционных заболеваний. Обязательно проводится обоим супругам.
  • Курс противовоспалительных препаратов.
  • Гормональная терапия.
  • Хирургические методы. Оперативные вмешательства применяются при варикоцеле, паховых грыжах, водянке яичка и т.д.

Когда лечение не дает эффекта или супруги не готовы ждать результата терапии, паре назначается экстракорпоральное оплодотворение. Выбор в пользу ЭКО часто делается в силу позднего репродуктивного возраста пациентов.

При патологиях спермы в программу ЭКО включаются дополнительные репродуктивные технологии:

  • процедуры ИКСИ/ПИКСИ (эмбриолог отбирает лучший сперматозоид и помогает ему проникнуть в яйцеклетку).
  • биопсия яичка и придатков (используется для получения сперматозоидов при азооспермии).

В самых тяжелых ситуациях супругам могут порекомендовать ЭКО с донорской спермой. Благодаря стремительному прогрессу репродуктивной медицины, таких случаев с каждым годом становится меньше. 

Лечение нарушений сперматогенеза в центре «Линия жизни»

Бесплодие – не приговор, даже возникшее вследствие тяжелейшей патологии сперматогенеза. Тысячи наших пациентов убедились в этом на собственном опыте. Обратившись однажды к помощи специалистов «Линии жизни», сейчас они наслаждаются отцовством.

Результативность лечения патологий спермы в наших клиниках базируется на нескольких факторах:

  1. Мы делаем спермограмму в собственной лаборатории, передовой уровень которой подтвержден международным аудитом. Исследование выполняется врачом-эмбриологом высшей категории. Соблюдаются все актуальные стандарты.
  2. Случаями бесплодия по причине нарушения сперматогенеза занимается команда врачей – уролог-андролог, репродуктолог, эмбриолог.
  3. В клиниках внедрены наиболее эффективные хирургические методы лечения заболеваний мужской репродуктивной системы.
  4. Показатели результативности ЭКО в центре «Линия жизни» выше средних по России, они находятся на уровне лучших европейских репродуктивных клиник.

В ведении пациентов с нарушениями сперматогенеза наши специалисты своей главной задачей считают наступление беременности. И успешно ее решают. Записывайтесь на прием к врачу «Линии жизни» удобным для вас способом – по телефону, через форму на сайте или в онлайн-чате.

Тератозооспермия что это такое и как лечить?

Что такое тератозооспермия?

Тератозооспермия — это патология, при которой нарушается процесс образования и созревания сперматозоидов, способных к оплодотворению яйцеклетки.

В данной ситуации в сперме наблюдается более 50% сперматозоидов с нарушением строения, в результате чего они становятся не способными к слиянию с яйцеклеткой.

То есть такие сперматозоиды либо вообще неспособны добраться до яйцеклетки и оплодотворить её, либо в результате формируется нежизнеспособный эмбрион и происходит выкидыш на ранних сроках.

Диагностика тератозооспермии

Тератозооспермия выявляется, когда пара долго и безуспешно пытается забеременеть. Врач-репродуктолог назначает мужчине два теста:

  • Спермограмму — лабораторное исследование спермы, которое показывает, в том числе, степень её густоты и слипания, вязкость, цвет, объем и прочие характеристики.
  • MAR-тест — выявляет количество активных сперматозоидов, которые могут оплодотворить яйцеклетку.

Возможны следующие результаты спермограммы:

  • Нормозооспермия — нормальный эякулят;
  • Олигозооспермия — концентрация сперматозоидов в сперме ниже нормы;
  • Астенозооспермия — сперматозоиды имеют подвижность ниже нормы;
  • Тератозооспермия — более половины сперматозоидов имеют неправильную морфологию (структуру), повреждены;
  • Олигоастенотератозооспермия — нарушение концентрации, подвижности и морфологии одновременно
  • Азооспермия — в эякуляте нет сперматозоидов;
  • Аспермия — нет эякулята.

Виды тератозооспермии

  • Неправильное строение головки, несколько головок.
  • Шейка неправильной толщины (слишком толстая или тонкая), что нарушает подвижность.
  • Хвост неправильной формы (тонкий, толстый, скрученный, неровный) — что также нарушает подвижность сперматозоида.

Причины возникновения тератозооспермии

Медицина пока не установила точно, что именно вызывает тератозооспермию. Известны лишь некоторые факторы, которые увеличивают ее вероятность:

  • Мочеполовые инфекции, особенно герпес;
  • Заболевания-провокаторы: простатит, варикоцеле, эпидидимит, орхит;
  • Гормональные нарушения, в том числе прием гормонов для наращивания мышечной массы;
  • Малоподвижный образ жизни, алкоголь, курение, наркотики;
  • Воздействие химиотерапевтических препаратов и другие факторы.

Иногда тератозооспермию считают идиопатической, так как причину установить не удается.

Лечение тератозооспермии и прогноз беременности

Если причина тератозооспермии установлена, врач может назначить лечение патологии, которая ее вызвала.

Прогноз возможности самостоятельной беременности от этого мужчины будет зависеть от степени и вида нарушения формирования спермы и от успешности лечения.

Стоит ли пробовать забеременеть самостоятельно без лечения?

Нет. Если поврежденный сперматозоид все-таки оплодотворит яйцеклетку, велика вероятность выкидыша на раннем сроке.

В редких случаях возможно рождение ребенка с серьезными патологиями. Особенно это касается сперматозоидов с неправильной головкой.

Поэтому в случае тератозооспермии, если патологию, которая к ней привела, не удается устранить, врач порекомендует паре выбрать методы ЭКО и ИКСИ.

Мужское бесплодие




Бесплодие – это не сугубо женское заболевание. Оно с равной долей вероятности может выявляться у обоих партнеров. Диагноз устанавливается в том случае, когда пара на протяжении года не может зачать ребенка, при условии регулярных попыток. При этом определить сразу у кого из супругов возникло бесплодие невозможно. Именно поэтому и мужчина, и женщина проходят комплексное обследование, которое поможет ответить на этот вопрос.

Причины мужского бесплодия


Фертильность (способность к зачатию) мужчины может нарушаться вследствие различных патологических процессов, которые затрагивают органы репродуктивной системы. Наиболее частыми из них являются:


  • Инфекции, передающиеся половым путем.
  • Инфекционные и воспалительные заболевания репродуктивных органов.
  • Врожденные аномалии.
  • Эндокринные заболевания.
  • Генетические мутации.
  • Некоторые урологические заболевания (варикоцеле) и др.


При этом примерно в 30% случаев точную причину бесплодия установить не удается.


Описанные выше заболевания могут приводить к различным нарушениям сперматогенеза, среди которых отмечаются:


  • Азооспермия – отсутствие сперматозоидов в эякуляте. В этом случае проблема может быть связана как с нарушением образования половых клеток в яичках, так и с нарушением проходимости семявыводящих протоках (обструктивное бесплодие).
  • Олигозооспермия – снижение половых клеток в эякуляте ниже нормы. В зависимости от степени тяжести выделяют 4 стадии олигозооспермии. На последнее стадии количество сперматозоидов в эякуляте снижается до 3 млн в 1 мл. несмотря на такое большое количество, вероятность зачатия в данном случае составляет всего 2%.
  • Астенозооспермия. Характеризуется снижением активных и подвижных сперматозоидов в объеме эякулята. Одни половые клетки могут передвигаться с меньшей скоростью, другие сохраняют подвижность только на месте, а третьи – полностью обездвиживаются.
  • Тератозооспермия. В данном случае в эякуляте выявляется большое количество половых клеток с аномалиями строения. При этом они могут сохранять подвижность, однако не способны оплодотворить яйцеклетку.


Возможны комбинации нескольких видов нарушения сперматогенеза, например, астенотератозооспермия или олигоастенотератозооспермия.



Как проявляется мужское бесплодие


Непосредственно бесплодие не сопровождается какой-либо клинической картиной. Однако причины, которые приводят к его появлению могут приводить к развитию характерных симптомов. Поэтому мужчины, у которых было выявлено бесплодие, могут предъявлять определенные жалобы.


  1. При инфекциях, передающихся половым путем, отмечаются зуд и жжение в уретре, патологические выделения, повышение температуры тела, воспалительные процессы в органах мочеполовой системы (уретрит, цистит).
  2. Если бесплодие развивается вследствие водянки яичка или варикоцеле, то мужчина может отмечать визуальное увеличение мошонки в размерах. При этом процесс мочеиспускания может быть затруднен, а во время полового акта возможны умеренные болезненные ощущения.
  3. При гормональных нарушениях изменяется психоэмоциональный фон, отложение жира на теле происходит по женскому типу (преимущественно на бедрах и животе), ухудшается состояние кожи, выпадают волосы.
  4. Опухолевое поражение яичек проявляется болью в области мошонки, снижением массы тела, недомоганием.
  5. При травме мошонки возможно появление крови в моче или эякуляте.


Таким образом, клиническая картина может значительно отличаться в каждом случае. Определенные симптомы и жалобы могут навести врача на мысль о возможной причине бесплодия, однако для получения объективной информации назначается комплексное обследование.


Методы диагностики



При подозрении на бесплодие оба супруга в обязательном порядке консультируются с врачом и проходят необходимое обследование. В план диагностики у мужчин входят:


  • Спермограмма.
  • УЗИ органов малого таза.
  • УЗИ полового члена и мошонки.
  • Анализ на инфекции, передающиеся половым путем.
  • Анализ простатического секрета.
  • Генетические исследования.
  • Определение гормонального статуса.


В некоторых случаях могут быть назначены более специфические тесты, например, определение иммунологической совместимости мужчины и женщины. Кроме того, в процессе обследования супругов могут принимать участие различные специалисты – генетик, уролог, сексолог, терапевт и др.


Не всегда проведенное обследование может установить точную причину бесплодия. Однако этот факт вовсе не означает, что пара не сможет иметь ребенка. Безусловно, в таких ситуациях процесс лечения может быть более длительным и сложным, но шанс на положительный исход есть всегда.



Методы лечения мужского бесплодия


Относительно благоприятными считаются те случаи, когда бесплодие у мужчин развивается в результате «банальных» сопутствующих заболеваний – инфекций, передающихся половым путем, воспалительных болезней репродуктивной системы, гормональных нарушений и др. В этом случае назначается консервативная терапия, которая, как правило, приводит к устранению причинного фактора и восстановлению фертильности.





Если сопутствующие заболевания привели к необратимым процессам, а также если проведенное лечение оказалось неэффективным, бесплодие устраняют при помощи вспомогательных репродуктивных технологий. Если говорить именно о мужском бесплодии, то применяются два метода:


  1. ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение). Применяется при низком «качестве» спермы. Метод проводится в несколько этапов. Сначала при помощи специальных препаратов у женщины стимулируется овуляция, затем хирургическим способом получают несколько яйцеклеток, а у мужчин – образец спермы. Если мужские половые клетки получить естественным способом не удается, то проводится биопсия яичка. После специалист вручную отбирает лучшие половые клетки и проводит процесс оплодотворения в контролируемых условиях. В результате получают несколько эмбрионов, которые после изучения под микроскопом пересаживаются женщине.
  2. Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ИКСИ). Этот вид вспомогательных репродуктивных технологий применяется в тех случаях, когда в эякуляте отмечается низкое количество мужских половых клеток либо они не способны к активному передвижению, но при этом имеют нормальную морфологию. Метод схож с ЭКО, но за одним исключением. При ЭКО оплодотворение проводится естественным способом, когда мужская и женская половые клетки «встречаются в пробирке». При ИКСИ сперматозоид вводится с помощью специальной иглы в цитоплазму яйцеклетки, при этом структура последней не нарушается.


Самыми сложными считаются те случаи, когда многочисленные попытки ЭКО оказываются неудачными, либо когда мужчина оказывается полностью стерильным. В таких ситуациях врач может порекомендовать использовать донорскую сперму.


Несмотря на достаточно высокую распространенность как мужского, так и женского бесплодия, ежегодно огромному количеству пар удается добиться беременности и получить статус родителей.






Тератозооспермия — Значение, причины, лечение и лечение

Мужчина с аномальной морфологией сперматозоидов Тератозооспермия: причины и лечение

Что такое тератозооспермия?

Хотя самой распространенной причиной мужского бесплодия является низкое количество сперматозоидов (технический термин для этого — олигоспермия), некоторые мужчины бесплодны из-за ненормального вида спермы. Это называется тератозооспермия (терато = монстр).

Многие бесплодные мужчины берут образцы спермы с низким количеством сперматозоидов, с плохой подвижностью и множеством сперматозоидов неправильной формы.Это называется олигоастенотератозооспермией.

Когда лаборатория проверяет сперму под микроскопом, они анализируют форму сперматозоидов (нормальная форма сперматозоидов или нет — это называется их формой или морфологией). В идеале, хороший сперматозоид должен иметь правильную овальную головку с соединительной мидель и длинный прямой хвост. Если слишком много сперматозоидов имеют неправильную форму (круглые головки; булавочные головки; очень большие головки; двойные головки; отсутствие хвостов), это может означать, что сперма ненормальна и не сможет оплодотворить яйцеклетку.Многие лаборатории используют «строгие» критерии Крюгера (разработанные в Южной Африке) для оценки нормальности сперматозоидов. Только «идеальная» сперма считается нормальной. В нормальном образце должно быть не менее 15% нормальных форм (что означает, что даже до 85% аномальных форм считаются приемлемыми!)

Почему мы беспокоимся о сперматозоидах неправильной формы?

Многие мужчины, у которых нормальное количество сперматозоидов составляет 50 миллионов на миллилитр с 98% аномальных сперматозоидов, часто спрашивают меня — у меня 1 миллион нормальных сперматозоидов — почему я не могу забеременеть своей женой? В конце концов, мне нужен только 1 сперматозоид, чтобы оплодотворить яйцеклетку! Это связано с тем, что сперматозоиды неправильной формы не могут оплодотворять яйцеклетку, потому что они не функционируют должным образом. И если 98% сперматозоидов, производимых в яичках, функционируют ненормально, оплодотворяющая (функциональная) способность оставшихся 2% сперматозоидов неизбежно вызывает подозрение!

Что делает мужчина с ненормальной спермой?

Большинство мужчин идут к врачу и ожидают, что тот пропишет лекарство, которое поможет им улучшить морфологию сперматозоидов и решить их проблему. В конце концов, они ожидают, что если медицинские технологии стали настолько продвинутыми, тогда должно быть какое-то лечение, доступное для решения такой распространенной проблемы!

Одна из новейших проблем, которые мы наблюдаем, — это то, что многие мужчины, как сообщается, страдают мужским бесплодием из-за аномальной морфологии сперматозоидов..

Ирония заключается в том, что большинство лаборантов вообще не имеют представления о том, как на самом деле проверять морфологию сперматозоидов. Существует Руководство ВОЗ по анализу спермы, в котором подробно описывается этот процесс, но подавляющее большинство индийских лабораторий не следуют этим рекомендациям, потому что это требует очень много времени и требует большого опыта.

Чтобы правильно определить морфологию сперматозоидов, сперму необходимо окрасить и оценить форму каждой отдельной спермы (не менее 100 сперматозоидов).У технических специалистов нет возможности следить за этим, поэтому они просто сокращают путь. Самая большая проблема заключается в том, что они сообщают, что большая часть сперматозоидов имеет ненормальную форму — и маркируют пациента как больного тератозооспермией, не предоставляя никаких подробностей!

Это пугает пациента, потому что он начинает верить, что это означает, что в конечном итоге у него родятся ненормальные дети. Кроме того, теперь врачи винят эту аномалию как причину бесплодия и ошибочно диагностируют у них мужское бесплодие из-за тератозооспермии.Они либо будут лечить их некоторыми лекарствами (которые совсем не помогают, но тратят время и деньги пациента), либо заставят их сделать ИКСИ (особенно если это лаборатория ЭКО).

Это совершенно неуместно, поэтому, пожалуйста, войдите в подробности отчета и настаивайте на том, что вы хотите увидеть подробности отчета об аномальных сперматозоидах. Просто сказать, что существует 97% аномальных форм, совершенно неприемлемо и предполагает, что лаборатория некомпетентна и некачественна.

В любом случае, вам следует повторить это снова в лучшей лаборатории, которая обладает необходимыми знаниями для правильного проведения анализа спермы.

Лечение тератозооспермии —

Проблема с лечением сперматозоидов плохой морфологии в том, что для большинства людей они просто не работают. Сам факт того, что существует так много способов «лечения» плохой морфологии сперматозоидов, говорит о том, что эффективного метода не существует. Это печальное положение дел сегодня, и необходимо многое узнать о причинах плохого производства спермы, прежде чем мы сможем найти эффективные методы лечения.

Однако пациенты хотят лечения, поэтому на врача оказывается давление, чтобы он прописал их, даже если он знает, что терапия может быть бесполезной. Когда большинство пациентов идут к врачу, они ожидают, что он пропишет лекарство и решит их проблему. Поскольку большинство людей все еще верят, что есть «таблетки от каждого больного», они ожидают, что врач даст им лекарство (или укол), которое улучшит морфологию их сперматозоидов. Ни один пациент никогда не хочет слышать правду о том, что на сегодняшний день действительно не существует эффективного лечения для улучшения морфологии сперматозоидов.

Поскольку большинство врачей это знают, их заставляют прописывать лекарства этим пациентам, потому что они не хотят, чтобы пациент был ими недоволен. Они обеспокоены тем, что, если они не выполнят ожидания пациента относительно рецепта, пациент бросит их и уйдет в другое место, поэтому они часто не говорят пациенту полной правды. Врач также помнит случайные анекдотические успехи (которые возвращаются для последующего наблюдения, в то время как другие покидают врача и теряются для последующего наблюдения) — вот почему пациентов с плохой морфологией сперматозоидов назначают на все виды лечения, которые только можно вообразить — с небольшой рациональной основой — кломифен, HMG и Инъекции ХГЧ (исходя из того, что то, что хорошо для гуся, должно быть полезно и для гусака!), Проксида, тестостерона, витамина Е, витамина С, антиоксидантов, высокопротеиновых диет, гомеопатических таблеток, аюрведических чуран и даже хирургии варикоцеле. Однако сам факт наличия сотен лекарств доказывает, что не существует действующего лекарства! (В конце концов, если бы одно лекарство подействовало, то его прописали бы все врачи, поэтому не было бы необходимости в таком большом количестве разных лекарств!)

Многие врачи оправдывают свои рецепты, говоря: «Все равно не повредит — и в любом случае, что еще мы можем сделать?» Однако такое отношение может быть положительно вредным. Это напрасная трата времени, в течение которого жена стареет, а ее способность к деторождению снижается.Пациенты недовольны, когда не происходит улучшения морфологии сперматозоидов, и теряют доверие к врачам. Это также мешает пациенту изучить эффективные методы альтернативной терапии, такие как ЭКО и ИКСИ. Сегодня эмпирическую терапию следует критиковать, если только она не используется в качестве краткосрочного терапевтического испытания с определенной конечной точкой.

Слово предупреждения. Медикаментозное лечение мужского бесплодия не имеет большого успеха и имеет неприятные побочные эффекты, поэтому не принимайте его, если ваш врач не объяснит свое обоснование. Лечение лучше всего считать «экспериментальным» и его можно попробовать в качестве терапевтического испытания. Однако убедитесь, что через три месяца семя проверено на улучшение, а затем решите, хотите ли вы продолжать.

Как насчет операции по лечению варикоцеле?

Помните, что многие мужчины с обширным варикоцеле имеют отличное количество и морфологию сперматозоидов, поэтому так сложно сопоставить причину (варикоцеле) и следствие (плохая морфология сперматозоидов). Вполне возможно, что варикоцеле может быть несвязанной находкой у бесплодных мужчин — так сказать, отвлекающим маневром.Это означает, что хирургическая коррекция варикоцеле может оказаться бесполезной для улучшения морфологии сперматозоидов — в конце концов, если варикоцеле не является причиной проблемы, то как его лечение поможет? Фактически, контролируемые испытания, сравнивающие хирургическое вмешательство при варикоцеле с отсутствием терапии у мужчин с варикоцеле и плохой морфологией сперматозоидов, показали, что частота наступления беременности такая же, так что, похоже, не имеет значения, лечится ли варикоцеле или нет!

Поскольку операция по лечению варикоцеле проста и понятна, многие врачи до сих пор лечат любое варикоцеле, которое они обнаруживают у бесплодных мужчин, следуя изречению, что лучше что-то делать, чем ничего не делать! Однако имейте в виду, что операция по удалению варикоцеле приведет к улучшению морфологии сперматозоидов только у 30% пациентов, и врач все еще не может предсказать, какой пациент получит помощь. Конечно, простого улучшения морфологии сперматозоидов недостаточно — и частота наступления беременности после лечения варикоцеле находится в пределах 15%. Однако одна из опасностей лечения варикоцеле заключается в том, что, когда это не помогает, пациенты разочаровываются и отказываются от использования более эффективных методов, таких как вспомогательные репродуктивные методы.

Печальный факт заключается в том, что сегодня не существует метода улучшения плохой морфологии сперматозоидов! Вот почему современное лечение плохой морфологии сперматозоидов широко использует вспомогательные репродуктивные технологии.

К сожалению, мы обнаружили, что многие врачи по-прежнему предлагают лечение ВМИ (внутриматочная инсеминация) мужчинам с тератозооспермией. Есть надежда, что промывание спермы поможет доктору восстановить «лучшую сперму»; а так как для оплодотворения яйцеклетки нужен только один сперматозоид, то ВМИ повысит шансы на беременность. К сожалению, ВМИ — ужасный метод лечения тератозооспермии с очень низким уровнем беременности. Проблема в том, что у мужчин с тератозооспермией есть функционально неполноценная сперма, поэтому промывание спермы и ВМИ не помогают.

ИКСИ произвел революцию в нашем подходе к бесплодию и обещает каждому мужчине возможность иметь ребенка, независимо от того, насколько ненормальна его сперма.

Мы лично предпочитаем предлагать лечение ИКСИ напрямую всем мужчинам с тератозооспермией, чтобы избежать риска полной неудачи оплодотворения с помощью ЭКО. Это позволяет нам гарантировать, что мы сможем создавать эмбрионы в лаборатории, независимо от качества спермы.

Как насчет ответа на вопрос на миллион долларов: — Почему у меня низкая морфология сперматозоидов? К сожалению, в девяти случаях из десяти врач не сможет ответить на этот вопрос, и никакие анализы не помогут нам выяснить — это обозначено как «идиопатическая тератозооспермия», которая на самом деле является диагнозом корзины для мусора для «Бога». знает только! ».Мы знаем, что плохая морфология сперматозоидов не связана с телосложением, общим состоянием здоровья, диетой, половым аппетитом или частотой. Хотя незнание причины может быть очень неприятным, медицине еще предстоит многое изучить и понять в отношении мужского бесплодия, которое сегодня является относительно игнорируемой областью.

Основная причина мужского бесплодия

Основной причиной мужского бесплодия обычно является проблема со спермой. Однако помните, что это не влияет на ваше либидо или сексуальное мастерство.Иногда мужчинам с недостаточностью яичек это трудно понять (но, доктор, я занимаюсь сексом два раза в день! Как у меня может быть нулевое количество сперматозоидов?). Причина этого в том, что семенник состоит из двух отделов. Одно отделение, семенные канальцы, производит сперму. Другой отсек, «интерстиций» или ткань между канальцами (где находятся клетки Лейдига) вырабатывает мужской половой гормон, тестостерон, который вызывает мужское половое влечение. Теперь, хотя канальцы можно легко повредить, клетки Лейдига гораздо более устойчивы к повреждениям и будут продолжать нормально функционировать у большинства пациентов с недостаточностью яичек.

Заключение

Вот почему диагноз «плохая морфология сперматозоидов» может быть таким ударом по эго — это совершенно неожиданно, потому что он не связан с другими симптомами или признаками. Мужчины реагируют по-разному, но общие чувства включают гнев на жену и врача; обида по поводу необходимости участвовать в обследовании и лечении бесплодия, поскольку они считают, что рожать детей — это «работа» женщины; потеря самооценки; и временная сексуальная дисфункция, такая как потеря желания и плохая эрекция.Многие мужчины также чувствуют себя очень виноватыми за то, что из-за «своих» медицинских проблем они лишают свою жену удовольствий материнства. К сожалению, социальная поддержка бесплодного мужчины практически отсутствует, и он вынужден встать на передний план и показать, что ему все равно. Поскольку он мужчина, ему не разрешается демонстрировать свои эмоции. Ожидается, что он обеспечит жене плечо, на котором она сможет плакать, но ему нужно научиться плакать одному. Однако помните, что влечение к отцовству может быть биологически столь же сильным, как влечение к материнству, и мы должны перестать относиться к бесплодным мужчинам как к гражданам второго сорта.!!

Роль гормонов на параметры спермы у пациентов с идиопатическим или связанным с варикоцеле синдромом олигоастенотератозооспермии (ОАТ)

Резюме

Предпосылки

Синдром олигоастенотератозооспермии (ОАТ) является наиболее часто встречающимся фенотипом при мужском бесплодии. Сперматогенез во многом зависит от гормональной регуляции. Целью этого исследования было оценить корреляцию между гормональным профилем и параметрами спермы у бесплодных мужчин с идиопатическим или связанным с варикоцеле синдромом ОАТ.Мы попытались проиллюстрировать корреляционные факторы для улучшения параметров спермы у этих пациентов.

Методы

Для оценки были включены 96 пациентов с идиопатическим или связанным с варикоцеле ОАТ. Уровни в сыворотке крови фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лютеинизирующего гормона (ЛГ), тестостерона (Т), эстрадиола (Е2), пролактина (ПРЛ) и комбинационных соотношений этих гормонов, таких как Т / Е2, Т / ФСГ, T / LH, T / (FSH × LH), PRL × T / FSH, PRL × T / LH, PRL × T / (FSH × LH) сравнивали индивидуально с параметрами сперматозоидов. Параметры включали концентрацию сперматозоидов, общее количество сперматозоидов (TC), процентное количество подвижных сперматозоидов, процентное количество нормальных сперматозоидов, общее количество подвижных сперматозоидов (TMC), общее нормальное количество сперматозоидов (TNC) и общее количество подвижных нормальных сперматозоидов (TMNC).

Результаты

T хорошо коррелировали с процентным нормальным количеством сперматозоидов ( p = 0,031). PRL положительно коррелировал с концентрацией сперматозоидов ( p = 0,019), TMC ( p <0,001), TNC ( p = 0,003) и TMNC ( p <0.001). В гормонально-комбинационных соотношениях Т / ФСГ, Т / ЛГ, Т / (ФСГ × ЛГ), ПРЛ × Т / ФСГ, ПРЛ × Т / ЛГ и ПРЛ × Т / (ФСГ × ЛГ) все показали значительную корреляцию с концентрацией и параметры, связанные с подсчетом, включая TC, TMC, TNC и TMNC.

Заключение

Для пациентов с синдромом ОАТ, T, PRL, T / FSH, T / LH, T / (FSH × LH), PRL × T / FSH, PRL × T / LH и PRL × T / (FSH × LH) могут использоваться в качестве прогнозирующих маркеров для лучшего качества спермы. Это исследование может стать катализатором будущих исследований того, в какой степени изменение гормональных комбинационных соотношений может влиять на качество сперматогенеза у бесплодных мужчин с синдромом ОАТ.

Идиопатическая олигоастенотератозооспермия у мужчин

РЕЗЮМЕ
Цель: Определить корреляцию энтре лос Parámetros Seminales microscópicos, integridad del ADN espermáticos y el estrés oxidativo (зависеть от аниона супероксидо). Материал и метод: Estudio prospectivo realizado en el Laboratorio de Andrología de In Vitro Gestar (Чиклайо, Перу) за октябрь 2013 г. y Agosto 2015. Проведена оценка 171 пациента. Проведите оценку 2 puntos de corte (18% y 30%) для оценки Fragmentación de ADN (IFA) en pacientes normozoospérmicos (NORMO) и pacientes con algún parámetro alterado (ALTERADO).Оцените результат воздействия оксидации (N1: не обнаруживается, N2: Nivel Bajo, N3: Nivel Medio) семенного материала и корреляции в pacientes NORMO y ALTERADO. С помощью средств вычисления среднего теста Манна-Уитни и анализа корреляции, используемого в тесте Спирмана, используется программное обеспечение SPSS 22. 0 для Windows. Результаты: Определено, что 45,03% de los varones atendidos presentaban alguna alteración en los parámetros sevenales. Se Determinó que el parámetro semenal más afectado fue la movilidad progresiva.Определена положительная корреляция между ИФА и изменением (r = 0,198; P = 0,009) и отрицательная корреляция между ИФА и концентрацией эспермата (r = -0,155; P = 0,043), общая концентрация (r = -0,170; P = 0,027), movilidad progresiva (r = -0,336; P = 0,000) y vitalidad (r = -0,289; P = 0,000). En el punto de corte 18%, se encontró diferencias Mongativas en las medias entre los dos grupos (Grupo 1: IFA≤18% y Grupo 2: IFA> 18%) en la edad (36,74 ± 6,05 VS 39, 60 ± 7,94), en la movilidad progresiva (47,33 ± 16,82 VS 38,27 ± 19,80) y Vitalidad (80,52 ± 2,16 VS 75,79 ± 13,71), соответственно.Así mismo, en el punto de corte 30% se encontró diferenciasignativas en las medias entre los dos grupos (Grupo 1: IFA≤30% y Grupo 2: IFA> 30%) en la movilidad progresiva (46,24 ± 17,65 VS 29,91 ± 16,89), морфология нормальная (5,11 ± 2,34 VS 3,67 ± 2,19) и виталидад (80,43 ± 8,76 VS 67,33 ± 17,73). Se encontró que en pacientes con Oxidación media (N3), los parámetros Seminales como contración espermática (123,22 ± 83,70 VS 58,33 ± 58,49), общая концентрация (261,54 ± 158,84 VS 156,87 ± 183,43), movilidad progresiva (55,46 ± 12,08 VS 31,06 ± 15,73), morfología normal (7,00 ± 2,91 VS 4,07 ± 2,48), vitalidad (85, 75 ± 6,41 VS 75,36 ± 9,43) e IFA (14,74 ± 7,08 VS 23,01 ± 15,22) tienen diferencias Mongativas en pacientes NORMO Y ALTERADO respectivamente.Заключение: Los resultados demuestran que los pacientes con alguna alteración espermática Presentan Valores, Mongativamente Diferentes con los normozoospérmicos congresso al IFA y N3. Se propone que estas pruebas sean utilizadas de rutina complementaras al espermatograma para brindar un mejor diagnóstico de infertilidad masculina.

Причины мужского бесплодия и способы увеличения мужской фертильности

Нарушения репродуктивной функции мужчин вызывают не менее 30% всех бесплодий, а возможно, и больше.

Распространенная причина бесплодия мужчин — аномалии спермы. Эти отклонения могут быть:

  • количество сперматозоидов (олигозооспермия)
  • движение или подвижность сперматозоидов (астенозооспермия)
  • внешний вид или морфология сперматозоидов (тератозооспермия)

Если присутствует одно из этих состояний, то дефект можно назвать одиночным, если присутствуют два, то дефект можно назвать двойным, а если присутствуют все три, то дефект можно назвать тройным (также известный как тройной дефект, олигоастенотератозооспермия или сокращенно ОАТ. ).

Чтобы понять степень тяжести мужского бесплодия (легкой, средней или тяжелой), можно выполнить анализ спермы. Поставить диагноз может быть сложно, поскольку выработка спермы сильно варьируется в течение определенного периода времени. Обычно на получение спермы уходит около двух месяцев, поэтому более частое тестирование не является идеальным.

Нормальные значения переменных спермы в соответствии с Руководством Всемирной организации здравоохранения по исследованию спермы человека (2010):

Том : 2. 0 мл или более
pH : 7,2-8,0
Концентрация сперматозоидов : 15 миллионов сперматозоидов / мл или более
Общее количество сперматозоидов : 40 миллионов сперматозоидов на эякулят или более
Подвижность : 50% или более при движении вперед прогрессирование (категории a и b) или 25% или более с быстрым прогрессированием (категория a) в течение 60 минут после эякуляции
Морфология : 4% или более с нормальными формами
Жизнеспособность : 75% или более живы

Важно исследовать сперму не менее двух раз, и если один анализ показывает отклонения от нормы, ее необходимо исследовать более двух раз.Важно, чтобы хотя бы один анализ спермы проводился учеными, специализирующимися на бесплодии, например, теми, кто работает в лаборатории ЭКО, такой как Care Fertility.

Мужской возраст

Фертильность самцов с возрастом снижается. Если женщине 35 лет и старше, а партнер-мужчина старше своей партнерши более чем на 5 лет, в среднем вероятность зачатия у пары на 30% ниже. В этом случае важно как можно раньше обратиться за помощью.

Заболевания яичек

Производство спермы может быть уменьшено, если у мужчины:

  • История аномального развития одного или обоих яичек
  • с травмой яичка
  • прошли курс лечения рака яичка, включая химиотерапию
  • мужское бесплодие в семейном анамнезе, но без выявленных генетических аномалий
  • генетические аномалии или ненормальное количество или расположение хромосом

Наиболее частой генетической причиной мужского бесплодия является синдром Клайнфельтера и сбалансированные транслокации.Иногда мужчины имеют генетические аномалии части Y-хромосомы или несут ген, отвечающий за вариант муковисцидоза.

Иногда образование сперматозоидов в яичках может быть слабым и необъяснимым. Недостаточно исследований причин мужского бесплодия, и многие вопросы о причинах мужского бесплодия остаются без ответа.

Заболевания гипофиза

Гипофиз, представляющий собой железу размером с горошину в основании мозга, выделяет два гормона, которые контролируют выработку спермы и половых гормонов. Эти два гормона называются лютеинизирующим гормоном (ЛГ) и фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ). Производство этих гормонов может быть низким, и яички не получают правильных сигналов для выработки половых гормонов и выработки спермы. Эти гормоны можно вводить в виде инъекций, что способствует выработке сперматозоидов в яичках. После нескольких месяцев инъекций мужчина может зачать ребенка посредством полового акта, если у его партнерши нет медицинских проблем, снижающих ее фертильность.

Редко гипофиз производит чрезмерное количество пролактина, что останавливает производство спермы.Принимая таблетку, количество пролактина уменьшается, что позволяет производить сперму.

Важно, чтобы у всех мужчин с плохим количеством сперматозоидов проверяли уровень пролактина.

Мужское бесплодие, индуцированное лекарствами

Наиболее частой причиной снижения количества сперматозоидов от лекарств является введение тестостерона. Тестостерон или другие анаболические стероиды иногда назначают, если мужчина жалуется на усталость или снижение сексуальной активности. Иногда их принимают ненадлежащим образом для повышения работоспособности или развития мышц.Тестостерон уменьшает количество сперматозоидов и уменьшает размер яичек. Для восстановления нормальной функции яичек может потребоваться несколько месяцев.

Иногда мужчинам с заболеванием гипофиза или яичек, у которых наблюдается дефицит гормонов, дают тестостерон, и это соответствует их благополучию и здоровью костей, но эти мужчины должны понимать, что выработка их спермы будет еще больше снижена, пока они принимают тестостерон.

Некоторые другие препараты, которые могут влиять на выработку спермы, включают марихуану, сульфасалазин (применяемый при воспалительном заболевании кишечника), антиандрогенные препараты для уменьшения выпадения волос, такие как финастерид, а также химиотерапию.

Дефекты эякуляции и ретроградная эякуляция

Дефекты эякуляции у большинства мужчин встречаются нечасто. Однако у мужчин с травмой позвоночника или диабетом обычно возникают трудности с эякуляцией.

Иногда во время эякуляции в мочевой пузырь может выделяться сперма. Хотя это часто не может быть решено, прием лекарств может предотвратить повреждение сперматозоидов мочой. Это состояние называется ретроградной эякуляцией. Сперму можно собрать из мочи после некоторого лечения (подщелачивания мочи) и использовать для оплодотворения яйцеклеток, собранных у партнера-женщины.

Препятствие

Препятствие оттоку спермы поддается лечению.

Самая частая причина непроходимости — это вазэктомия. Это лечится путем отмены вазэктомии или сбора спермы из яичка. Антитела к сперматозоидам могут быть проблемой, и часто необходимы ЭКО и ИКСИ.

Другая причина обструкции — наличие двух генов, отвечающих за вариант муковисцидоза. Это называется врожденным отсутствием семявыносящего протока. Сперма обычно доступна в семенниках нормального размера и может быть получена хирургическим путем.Партнерша должна пройти обследование, чтобы проверить, является ли она носителем гена муковисцидоза, так как 1 из 22 человек несет этот ген, и есть 1 из 4 риска рождения ребенка с муковисцидозом, если оба родителя являются носителями этого гена. . В таких случаях может быть предложено доимплантационное генетическое тестирование.

Факторы образа жизни

Есть несколько факторов образа жизни, которые могут помочь с нарушением выработки спермы. Вот некоторые из наиболее проверенных способов:

  • Курение сигарет следует прекратить, так как оно снижает эффективность циклов ЭКО наполовину
  • У мужчин с ожирением пониженное количество сперматозоидов, слабое развитие эмбрионов и учащение выкидышей, поэтому важно поддерживать нормальный вес.
  • Марихуана и чрезмерное употребление алкоголя (более 14 стандартных порций в неделю) следует прекратить.

Лечение, которое, как считается, помогает при бесплодии, но не доказано, включает:

  • добавки цинка
  • фолиевая кислота и поливитамины
  • органическая диета.

Считается, что регулярная эякуляция, по крайней мере, два-три раза в неделю снижает выработку «старой» или поврежденной спермы, и поэтому рекомендуется мужчинам, пытающимся забеременеть.

Долгосрочные последствия мужского бесплодия

Мужчины с пониженным количеством сперматозоидов подвержены повышенному риску рака яичек, и им следует регулярно обследовать яички. Если обнаружено уплотнение, они должны немедленно явиться на обследование и оценку. Некоторые мужчины, особенно с резким снижением выработки спермы, могут подвергаться риску дефицита мужских гормонов. Это может подвергнуть их риску остеопороза.

Важно, чтобы всех мужчин с мужским бесплодием осмотрел и обследовал специалист.Care Fertility стремится к улучшению здоровья мужчин, признавая мужское бесплодие и его последствия.


Статьи по теме

Олигоастенотератозооспермия и бесплодие у мышей, дефицитных по локусам miR-34b / c и miR-449

Abstract

Мужская фертильность требует непрерывного производства высококачественных подвижных сперматозоидов в большом количестве. Изменения всех трех показателей вызывают олигоастенотератозооспермию, ведущую причину суб / бесплодия у человека. Постмитотический сперматогенез, включающий несколько мейотических стадий, и спермиогенез (терминальная дифференцировка сперматозоидов) являются транскрипционно инертными, что указывает на потенциальную важность посттранскрипционного пути молчания генов микроРНК (миРНК). Мы обнаружили экспрессию miRNA, генерирующего фермент Dicer в пиках сперматогенеза в мейозе с критическими функциями в сперматогенезе. При скрининге экспрессии мы идентифицировали два локуса miRNA семейства miR-34 (miR-34b / c и miR-449), которые специфически и высоко экспрессируются в постмитотических мужских половых клетках.Снижение количества нескольких miRNA, включая miR-34b / c, в сперматозоидах причинно связано со снижением фертильности у людей. Мы обнаружили, что делеция локусов miR34b / c и miR-449 приводит к олигоастенотератозооспермии у мышей. Дефицит MiR-34bc / 449 нарушает как мейоз, так и заключительные стадии созревания сперматозоидов. Анализ miR-34bc — / — ; 449 — / — пахитенных сперматоцитов выявил небольшую когорту дерегулированных генов, которые были высоко обогащены генами-мишенями семейства miR-34. Наши результаты идентифицируют семейство miR-34 как первые функционально важные miRNAs для сперматогенеза, нарушение регуляции которых является причиной олигоастенотератозооспермии и бесплодия.

Сведения об авторе

Устойчивое производство функциональных подвижных сперматозоидов имеет решающее значение для мужской фертильности. В последние годы зарегистрировано резкое увеличение случаев мужского бесплодия, наиболее частой причиной которого является выработка морфологически аномальных сперматозоидов с низкой подвижностью.Доказано, что на развитие сперматозоидов влияют несколько генетических факторов и факторов окружающей среды. В частности, предварительные исследования образцов от фертильных и бесплодных людей показали, что нарушение регуляции класса малых некодирующих РНК, называемых микроРНК, может быть вредным для образования сперматозоидов. С этой целью мы исследовали экспрессию Dicer, основного компонента пути микроРНК, в мужских половых клетках и наблюдали пик экспрессии во время мейоза. Мы провели скрининг экспрессии микроРНК и идентифицировали 5 членов семейства miR-34 (miR-34bc и miR-449abc) с высокой экспрессией от позднего мейоза до стадии сперматозоидов.Делеция miR-34bc и miR-449 приводит к бесплодию из-за продукции аномальных сперматозоидов со сниженной подвижностью. Таким образом, наша работа впервые доказывает важность семейства микроРНК в формировании сперматозоидов и мужской фертильности.

Образец цитирования: Comazzetto S, Di Giacomo M, Rasmussen KD, Much C, Azzi C, Perlas E, et al. (2014) Олигоастенотератозооспермия и бесплодие у мышей, дефицитных по локусам miR-34b / c и miR-449. PLoS Genet 10 (10):
e1004597.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pgen.1004597

Редактор: Эрик А. Миска, Кембриджский университет, Соединенное Королевство

Поступила: 5 мая 2014 г .; Принята к печати: 10 июля 2014 г .; Опубликовано: 16 октября 2014 г.

Авторские права: © 2014 O’Carroll et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводов, полностью доступны без ограничений. Все данные массива депонированы в ArrayExpress под регистрационным номером E-MTAB-2668 и E-MTAB-2676.

Финансирование: Авторы не получали специального финансирования на эту работу.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Сперматогенез — это сложная программа развития, которая поддерживает образование сперматозоидов и фертильность на протяжении всей жизни взрослого мужчины.Сперматогенез можно разделить на три основные фазы: митотическую фазу, мейоз и спермиогенез [1]. Митотические стадии сперматогенеза охватывают сперматогониальные стволовые клетки (SSC), а также дифференцирующиеся сперматогонии. SSCs лежат в основе гомеостаза яичек, тогда как дифференцирующиеся сперматогонии действуют как транзитные амплифицирующие клетки, генерируя большой пул клеток, которые будут претерпевать несколько процессов терминальной дифференцировки [2]. Из одного раунда репликации ДНК с последующими двумя последовательными наборами хромосомных делений мейоз генерирует круглые сперматиды с гаплоидно рекомбинированными геномами [3].Эти круглые сперматиды затем подвергаются морфогенному процессу спермиогенеза, который преобразует эти круглые клетки через промежуточное звено, известное как удлиняющиеся сперматиды, в сперматозоиды [1]. Интересно, что мейотические стадии лепто / зиготены, а также терминальные стадии спермиогенеза в основном транскрипционно инертны, это указывает на то, что большая часть регуляции экспрессии генов д. Происходить на посттранскрипционном уровне [4], [5]. После завершения спаривания хромосом в конце зиготены транскрипция возобновляется в ранних клетках пахитены [4], [5].Полный набор и важность механизмов, которые лежат в основе регуляции экспрессии генов в эти периоды транскрипционного покоя / возрождения, остаются неопределенными.

миРНК представляют собой кодируемые геномом небольшие некодирующие РНК длиной 21–23 нуклеотида, которые негативно посттранскрипционно регулируют экспрессию генов либо через деградацию целевых мРНК, либо за счет ингибирования трансляции [6]. MiRNA, кодирующие транскрипты, последовательно процессируются под действием двух рибонуклеаз III типа, Drosha и Dicer [7] — [10].Дроша формирует каталитическое ядро ​​ядерного микропроцессорного комплекса, который расщепляет первичные транскрипты miRNA, давая предшественник miRNA (pre-miR), структуру стержневой петли из 60–70 нуклеотидов [8]. После генезиса pre-miR экспортируется в цитоплазму, где он обрабатывается Dicer в пределах комплекса RNA-индуцированного сайленсинга (RISC), который расщепляет концевую петлю с образованием промежуточного дуплекса miRNA 21–22 нуклеотидов [9] — [11]. Впоследствии одна цепь этого дуплекса, возникающая miRNA, включается в белок Argonaute (Ago), который является ключевым компонентом RISC и выполняет функцию miRNA [12], [13].MiRNA определяет целевую специфичность RISC посредством спаривания оснований с комплементарными РНК [13], [14]. Большинство miRNA демонстрируют несовершенную комплементарность со своими транскриптами-мишенями, а специфичность в первую очередь определяется «затравочной» (основания 2-8) последовательностью miRNA [14], [15]. MiRNA также классифицируются на основе их посевных последовательностей, локусы miRNA, которые имеют одинаковые посевные последовательности, сгруппированы в семейства [16]. После связывания RISC miRNAs первоначально ингибируют трансляцию транскрипта с последующей дестабилизацией за счет привлечения комплекса деаденляции CCR4-NOT [17], [18].MiRNAs вызывают умеренные изменения в экспрессии генов-мишеней в 1,5–3 раза на уровне транскриптов [19] — [21]. Интересным аспектом этого повсеместного посттранскрипционного пути молчания генов является то, что данная miRNA может иметь множество транскриптов-мишеней и, таким образом, тонко настраивать или буферизовать экспрессию множества генов внутри клетки [19] — [21]. В то время как miRNAs, как было обнаружено, регулируют множество онтогенетических и физиологических процессов, на сегодняшний день не было обнаружено, что они регулируют сперматогенез млекопитающих.

Results and Discussion

Важность посттранскрипционной регуляции экспрессии генов в сперматогенезе побудила нас изучить вклад пути miRNA в этот процесс. Дайсер RNase III катализирует последний этап канонического биогенеза miRNA и, таким образом, уровни его экспрессии в популяциях тестикулярных зародышевых клеток могут указывать на то, где этот путь или биогенез miRNAs для текущего или последующего использования будут важны. Поскольку антитела против мышиного Dicer, которые функционируют для иммунофлуоресценции тканей, отсутствуют, мы, таким образом, генерировали нокаутный аллель у мышей, несущих N-концевой Flag-HA 2 , помеченный Dicer ( Dcr FH ) (рис.1A – C). Тег Flag-HA 2 не оказывал отрицательного воздействия на функцию Dicer, поскольку мыши, гомозиготные по аллелю Dcr FH , являются жизнеспособными и фертильными. Визуализация в срезах семенников взрослых Flag-HA 2 -Dicer с антителами против НА выявила обильную экспрессию Dicer в митотических сперматогониях и на ранних мейотических стадиях пре-лептотены и лептотены. После этого активность Dicer повышалась в зиготене, достигая максимальной экспрессии в ранних сперматоцитах пахитены (рис.1D). Начиная с середины пахитены и далее активность Dicer снижалась, но все же обнаруживалась на более поздних стадиях спермиогенеза (рис. 1D). Паттерн экспрессии Dicer д. Предполагать критическую функцию пути miRNA в мейозе, а также во время развития гаплоидных зародышевых клеток. Хотя неканонические пути биогенеза miRNA действительно существуют, только одна miRNA (miR-451), как было показано, не зависит от Dicer [22] — [24]. Помимо miRNAs, другие продукты Dicer, эндогенные siRNAs, до сих пор были обнаружены только в ооцитах и ​​ESCs [25] — [27].В то время как неспособность обнаружить siRNA в мужских половых клетках не может формально исключить их присутствие в них, потеря Dicer более чем вероятно может быть использована для исследования функции пути miRNA в постмитотическом сперматогенезе. Важность Dicer в раннем развитии зародышевых клеток была показана посредством его условного удаления во время раннего эмбриогенеза в первичных половых клетках (PGCs) с использованием TNAP-Cre [28]. Эта потеря Dicer приводит к пролиферативным дефектам PGCs либо с отсутствием, либо с задержкой сперматогенеза в семенных канальцах взрослых [28].Чтобы понять, требуется ли Dicer во время мейоза, мы объединили аллель Dicer LoxP (Dcr Fl ) с трансгеном Stra8Cre, который удаляет дифференцирующиеся сперматогонии, чтобы генерировать условные нокауты Dicer мейоза (Dicer C-KO ) [29] — [31]. У некоторых из этих животных была потеряна фертильность; генотипирование детенышей, полученных от фертильных мышей Dicer C-KO , выявило присутствие не удаленного аллеля Dcr Fl , что указывает на неполную делецию у этих животных.Гистологическое исследование срезов семенников Dicer C-KO выявило наличие сильно аномальных семенных канальцев с высоким индексом апоптоза (рис. 1E – F). Таким образом, нарушение функции Dicer оказывает большое влияние на постмитотическое развитие мужских половых клеток.

Рис. 1. Экспрессия и функция Dicer в сперматогенезе взрослых.

( A ) Показана доменная структура белка Dicer. Изображена организация 5′-части локуса Dicer .Направленный вектор, используемый для введения FlagHA 2 в локус Dicer , и схематическая карта нацеленного гена Dicer до и после Cre-опосредованной рекомбинации показаны. Треугольники представляют сайтов loxP , как указано. Прямоугольники указывают положение генов маркеров селекции Neomycin (Neo) и Diptheria toxin A (DTA) . Указаны сайты рестрикции SacI, а также соответствующие Саузерн-фрагменты, обнаруженные 3′-зондом.Показана схематическая диаграмма полученного белка FlagHA 2 -Dicer. ( B ) Саузерн-блоттинг полученной из хвоста расщепленной SacI ДНК от мышей дикого типа и мышей Dcr + / FH-Neo показан с 3′-зондом, указанным в A. ( C ) Вестерн-блот с использованием анти-НА и показаны антитела против SMC1 на экстрактах из семенников дикого типа и Dcr + / FH . ( D ) Показана иммунофлуоресценция с использованием антител против НА и против γh3AX на половых клетках семенников Dcr + / FH из срезов семенников взрослых.Шкала шкалы = 10 мкм. ( E ) Срез семенников, окрашенных гематоксилином и эозином, от взрослых мышей Dcr , Ctl и Dcr C-KO с показанными типичными канальцами. Масштабные полосы = 50 мкм и 20 мкм на верхней и нижней панели соответственно. ( F ) Повышенный апоптоз в яичках Dcr C-KO . Тест TUNEL с контрастным окрашиванием DAPI показан на срезах семенников взрослых мышей Dcr Ctl и Dcr C-KO . Клетки апоптоза окрашиваются в зеленый цвет. Масштабные линейки = 50 мкм и 10 мкм на верхней и нижней панели соответственно.Сокращения: P, пахитена и RS, круглая сперматида. Типичные изображения показаны по крайней мере от 3 мышей, проанализированных на панелях D – F.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.g001

Экспрессия и функция Dicer во время сперматогенеза взрослых указывает на критическую роль не только коллективного пути miRNA, но также потенциально и индивидуальных miRNA. Поэтому мы решили провести скрининг экспрессии miRNA, чтобы идентифицировать такие индивидуальные локусы miRNA. С этой целью культивированных in vitro линий клеток SSC, репрезентативных митотической фазы сперматогенеза, а также ex vivo, изолированных мейотических сперматоцитов и постмейотических круглых сперматид были отобраны для профилирования miRNA.Интересно, что популяции постмитотических сперматоцитов и круглых сперматид обнаруживают очень сходные профили экспрессии miRNA, которые очень отличаются от митотических SSC с двунаправленной регуляцией многих локусов miRNA на этих наблюдаемых стадиях развития (Fig. 2A). MiR-34b / c выделяется из этого анализа из-за бинарной природы их экспрессии, по существу, отсутствуя в SSCs, чтобы представлять одну из наиболее широко экспрессируемых miRNAs в постмитотических зародышевых клетках (Fig. 2A-B). MiR-34b / c miRNA являются частью семейства miR-34, включающего шесть miRNA (miR-34a, b, c и 449a, b, c), кодируемые тремя разными локусами (miR-34a, miR-34b / c и miR -449) (Рис.2Б). Локус miR-34a обнаруживает повсеместные и низкие уровни экспрессии через сперматогенез и в целом повсеместно экспрессию в тканях (Fig. 2A-C). Напротив, miR-449a обнаруживает бинарную экспрессию как miR-34b / c во время сперматогенеза, но в целом имеет более низкую экспрессию (Fig. 2A-B). И miR-34b / c, и miR-449 обнаруживают сильно ограниченные профили экспрессии в ассортименте тканей мышей (Fig. 2C) [32]. Затем мы хотели определить точное начало появления miR-34b / c и miR-449a во время сперматогенеза, и мы решили воспользоваться преимуществами первой волны сперматогенеза, поскольку она протекает почти синхронно с появлением следующих друг за другом сперматогенных популяций среди молодых особей. развитие мыши (рис.S1A). Нозерн-блоттинг тестикулярной РНК выявил устойчивую экспрессию miR-34b / c и miR-449a на 14-й постнатальный день, время, когда наблюдается появление пахитеновых сперматоцитов. miRNA in situ , соединенная с иммуноокрашиванием γh3AX в качестве мейотического маркера, выявила начало экспрессии miR-34c в ранних пахитеновых сперматоцитах в пределах первой волны (рис. 2E). Такое же начало экспрессии у взрослых наблюдалось при устойчивой экспрессии miR-34c, обнаруживаемой на протяжении мейоза и спермиогенеза (рис.2F). Наш анализ идентифицирует локусы miR-34b / c и miR-449 как специфически и обильно экспрессируемые в постмитотических половых клетках.

Рисунок 2. miR-34b / c и miR-449 избирательно экспрессируются в постмитотическом сперматогенезе.

( A ) Тепловая диаграмма, суммирующая экспрессию miRNA в митотических линиях in vitro, культивируемых сперматогониальных стволовых клеток (SSC), ex vivo, изолированных мейотических сперматоцитов (sp. Цитов) и спермиогенных круглых сперматидах (RS). Показана средняя экспрессия биологических реплик.( B ) Зрелая последовательность miRNA семейства miR-34 мыши показана с затравочной последовательностью, выделенной красным. Экспрессия членов семейства miR-34 суммирована из данных массива. ( C ) Экспрессию семейства miR-34 определяли посредством Нозерн-блоттинга РНК, полученной из широкого набора тканей. U6 snRNA и Let-7a использовали в качестве контроля загрузки. Сокращения: BM — костный мозг; Sp, селезенка; Thy, Тимус; Лимфатический узел; Te, семенник; Ov, яичник; Му — мышца, Хе — сердце; Ли, печень; Лу, легкое; Дитя.Почки и Пе, клетки полости брюшины. ( D ) Экспрессию членов семейства miR-34 определяли в первой волне сперматогенеза с помощью Нозерн-блоттинга общей РНК из семенников в указанный день после родов (dpp), Ad указывает взрослого. U6 мяРНК использовали в качестве контроля загрузки. Репрезентативные данные показаны из двух независимых экспериментов на панели C и D. ( E ) Начало экспрессии miR-34c в ранних пахитенных сперматоцитах во время первой волны сперматогенеза. Пространственная экспрессия miR-34c (зеленый) демонстрируется гибридизацией in situ на срезах 14 dpp семенников мыши, срезы контрастировали анти-γh3AX (красные) антителами для точной идентификации стадии мейоза. Масштабная линейка = 30 мкм. Сокращения: L — лептотен; Z — зиготена; EP, ранняя пахитена и P, пахитена. ( F ) Показана экспрессия miR-34c (зеленый) посредством гибридизации in situ в указанных взрослых сперматогенных популяциях. Анти-γh3AX (красный) использовали, как в (E). Шкала шкалы = 10 мкм. Репрезентативные изображения одного из трех независимых экспериментов показаны для панелей E и F.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.g002

Гены семейства miR-34 являются важными регуляторами судьбы и физиологии клеток.Локусы MiR-34a и miR-34b / c являются прямыми генами-мишенями p53 со способностью репрессировать индуцированное репрограммирование [33] — [35]. Локус miR34a также регулирует сердечную функцию при старении, однако ни одно из нарушений отдельных генов семейства miR-34 не влияет на фертильность у мышей (Fig. S2) [32], [34] — [36]. Обладая сходством экспрессии локусов miR-34b / c и miR-449 и их потенциальной функциональной избыточностью в отношении сперматогенеза, мы создали miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей (рис. 3А), рожденные в менделевских соотношениях. И самцы, и самки miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей были бесплодны при спаривании с мышами дикого типа (фиг. 3B). Гистологический анализ придатка яичка показал резкое сокращение количества сперматозоидов: количественно это отразилось в резком 60-кратном падении количества сперматозоидов у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — , у которых было значительное количество сперматозоидов (рис. . 3C – D). У других мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — сперматозоидов было так мало, что их количество приближалось к нулю (рис.3D). Более того, наблюдалось снижение не только количества зрелых сперматозоидов, но и их качества. MiR-34bc — / — ; 449 — / — сперматозоиды имели аберрантную морфологию с наблюдаемым разделением головок и хвостов сперматозоидов (рис. 3E). Соответственно, подвижность сперматозоидов miR-34bc — / — ; 449 — / — сперматозоидов серьезно пострадала. Таким образом, у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей наблюдалось бесплодие из-за низкого количества сперматозоидов, а также сперматозоидов, которые были неподвижны и имели аберрантную морфологию.Этот фенотип классифицируется как олигоастенотератозооспермия и является основной причиной мужского бесплодия у людей [37].

Рисунок 3. Олигоастенотератозооспермия и бесплодие у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей.

( A ) qRT-PCR miR-34a, miR-34b, miR-34c и miR-449a из контроля (Ctl) и miR-34bc — / — ; 449 — / — семенников взрослого. ( B ) miR-34bc — / — ; 449 — / — самцов мышей бесплодны.Показано количество детенышей, рожденных на одну пробку от мышей дикого типа и miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей. Количество протестированных животных и среднее значение ± s.e.m. указаны. ( C ) Показан срез придатка яичка, окрашенный гематоксилином и эозином, из контроля (Ctl) и miR-34bc — / — ; 449 — / — взрослых мышей. Показано типичное изображение 5 проанализированных мышей. Масштабная линейка = 50 мкм. ( D ) Уменьшение количества сперматозоидов у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей.Среднее количество сперматозоидов ± s.e.m. из контроля и miR-34bc — / — ; показано 449 — / — взрослых мышей (n = 8). ( E ) Показана морфология сперматозоидов указанных генотипов. Шкала шкалы = 10 мкм. *** и **** обозначают значение p (непарный t-критерий с поправкой Велча) <0,001 и <0,0001 соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.g003

Установив, что потеря как локусов miR-34b / c, так и miR-449 приводит к олигоастенотератозооспермии, мы затем хотели определить этиологию этого заболевания.С этой целью мы изучили влияние дефицита miR-34bc / 449 на сперматогенез. Сразу же очевидно было истончение эпителия в семенных канальцах у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — (рис. 4A). Примерно в 5% канальцев семенников клетки на стадии зиготены были наиболее развитыми сперматогенными клетками, которые можно было обнаружить (рис. 4B). В большинстве канальцев гистологическое исследование выявило внешне нормальный вид половых клеток до стадии развития пахитены, после чего было обнаружено несколько сперматогенных дефектов (рис.4А). В частности, было очевидным снижение количества половых клеток после стадии пахитены. Более того, у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — развитие оставшихся круглых сперматид, по-видимому, продолжалось нормально до последних стадий спермиогенеза, когда наблюдалось резкое уменьшение удлиняющихся сперматид (рис. 4A). ). Соответственно, высокая частота апоптоза была определена в пахитеновых стадиях мейоза, а также в удлиняющихся сперматидах (рис. 4С). Начало фенотипа у мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей полностью совпало с доменом экспрессии miR34b / c, наблюдаемым в сперматогенезе взрослых людей дикого типа. Чтобы точно количественно оценить влияние дефицита miR-34bc / 449 на соответствующие популяции зародышевых клеток в яичках, мы использовали окрашивание по Хехсту тестикулярных клеток, проанализированных с помощью FACS, которое может эффективно различать лепто-зиготены, пахитен-диплотены, круглые сперматиды и удлиняющиеся популяции сперматид. (Рис. 4D) [38], [39]. Этот анализ выявил общее снижение клеточности miR-34bc — / — ; 449 — / — семенников, но это снижение было неравномерно распределено по стадиям развития (рис.4E). Нормальные количества лепто-зиготеновых клеток наблюдались в miR-34bc — / — ; 449 — / — семенниках, после чего было очевидно значительное снижение на последующих стадиях (рис. 4E). Таким образом, в сочетании с гистологическим анализом мы можем заключить, что семейство miR-34 выполняет множество функций во время сперматогенеза как в регуляции мейоза, так и на более поздних стадиях спермиогенеза (Рис. 4F).

Рисунок 4. miR-34bc / 449 необходимы для нескольких стадий постмитотического сперматогенеза.

( A ) PAS-окрашенный срез семенников от взрослых контрольных животных и miR-34bc — / — ; показаны 449 — / — мышей. Обзор нескольких канальцев показан на верхних панелях. Увеличенные и ступенчатые канальцы представлены на нижних панелях, схематическая диаграмма суммирует сперматогенное содержание канальцев у мышей дикого типа. Сокращения: Pl, прелептотен; Z — зиготена; P, пахитен; D, диплотен ;; RS — круглая сперматида и ES — удлиненная сперматида. Масштабные линейки = 50 мкм и 10 мкм на верхней и нижней панелях соответственно.( B ) MiR-34bc — / — ; 449 — / — срезов семенников и процент канальцев с остановкой мейоза на стадии зиготены. Масштабные линейки = 30 мкм и 20 мкм на верхней и нижней панели соответственно. Типичные изображения показаны от 6 проанализированных мышей, которые показаны на панели A и B. ( C ) Повышенный апоптоз в miR-34bc — / — ; 449 — / — яичка. Тест TUNEL с контрастным окрашиванием DAPI (синий) показан на срезах яичек взрослых контрольных животных и мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — мышей (верхняя панель).Клетки апоптоза окрашиваются в зеленый цвет. Апоптотические miR-34bc — / — ; 449 — / — пахитены (P) и удлиняющиеся сперматиды (ES) показаны на нижней панели вместе с неапоптотическими контрольными клетками. Масштабные линейки = 30 мкм и 10 мкм на верхней и нижней панели соответственно. Показаны репрезентативные изображения 3 проанализированных мышей. ( D ) Показан график FACS семенников взрослых, закрытые популяции на верхней панели I (лепто-зиготена) и II (пахитен-диплотена), на нижней панели III (круглые сперматиды) и IV (удлиненные сперматиды).Цифры указывают на общий процент соответствующих популяций. ( E ) Сравнительный подсчет сперматогенных популяций контрольных (Ctl) и miR-34bc / 499 — / — мышей. Показано общее количество клеток яичка (вверху). Числа, нанесенные для определяемых в процессе развития субпопуляций, обозначенных в (D) римскими цифрами (нижняя панель). С помощью FACS было проанализировано 8 животных на каждый генотип. Среднее ± s.e.m. значения показаны на графике. ( F ) Схематическая диаграмма, показывающая экспрессию и влияние потери экспрессии miR-34bc / 449.* и *** обозначают значение p (непарный t-критерий с поправкой Велча) <0,05 и <0,001 соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.g004

Далее мы хотели изучить механизмы, с помощью которых miR-34bc / 449 поддерживает сперматогенез. Связывание miRNA: RISC с мРНК-мишенями приводит к дестабилизации транскрипта, этот аспект подавления miRNA используется для надежной идентификации мишеней miRNA из анализа клеточных транскриптомов с усилением или потерей специфической функции miRNA [19] — [21].miRNAs оказывают относительно небольшое влияние — порядка 1,5–3-кратного изменения целевых мРНК, поэтому выделение чистых популяций клеток от мышей дикого типа и мутантных мышей имеет решающее значение для сравнительного транскриптомного анализа и идентификации генов-мишеней miRNA. Дефицит MiR-34bc / 449 влияет как на мейоз, так и на последние стадии спермиогенеза, FACS можно использовать для сортировки обеих этих популяций, однако в случае удлинения сперматид клетки повреждаются во время процесса, теряя как свои хвосты, так и цитоплазму.Поэтому мы решили профилировать сперматоциты пахитенов от контрольных мышей и мышей miR-34bc — / — ; 449 — / — . Эта популяция также имеет дополнительное преимущество в том, что это тип клеток, где впервые наблюдается начало экспрессии miR-34bc / 449 и, таким образом, вероятно, наиболее многообещающая стадия для определения первичного воздействия недостаточности miR-34bc / 449. Сравнение клеток пахитена дикого типа и miR-34bc — / — ; 449 — / — выявило относительно незначительные изменения в транскриптоме (рис.5A), установив порог в 1,4 раза (Log 2 > 0,5 раза) и со значением значимости более 0,05, мы обнаружили, что у мутанта 22 гена активированы, а 2 гена подавлены (фиг. 5A). В экспериментах с потерей функции miRNA ожидается потеря репрессии и сопутствующее увеличение целевой дозировки. Поразительно, что 13 из 22 генов с повышенной регуляцией содержали 3’UTR miR-34 «семенные» совпадения и были предсказанными мишенями семейства miR-34 (Рис. 5 A – B). Нарушение регуляции 9 из 13 прогнозируемых целей может быть подтверждено с помощью qRT-PCR (рис.5С). Затем мы использовали Sylamer для поиска значительного обогащения 7 нуклеотидных мотивов, соответствующих всем известным затравочным мотивам miRNA, по 3’UTR всех генов, расположенных от наиболее положительно регулируемых до наиболее подавляемых у мутанта (рис. 5D). Этот беспристрастный подход выявил очень значимое обогащение ( p = 2,44 × 10 -9 ) для комплементарного соответствия семян семейства miR-34 (CACTGCC) в когорте наиболее нерегулируемых генов (рис. 5D). Что наиболее важно, в этом анализе не было идентифицировано никаких других значимых совпадений семян miRNA.Из 9 подтвержденных идентифицированных генов мишеней miR-34 фактор транскрипции вилки FoxJ2 заслуживает особого внимания, поскольку он содержит два высококонсервативных сайта связывания miR-34 и было показано, что трансгенные уровни сверхэкспрессии FoxJ2 несовместимы с мужской фертильностью [40]. Вместе эти анализы показывают, что потеря miR-34bc / 449 оказывает внутреннее влияние на мейотический транскриптом и идентифицирует небольшую когорту вероятных прямых генов-мишеней miR-34bc / 449.

Рисунок 5. miR-34bc / 449 регулирует небольшую когорту генов в сперматоцитах.

( A ) Диаграмма разброса экспрессии, показывающая относительную среднюю экспрессию зондов affymetrix между контролем (ось x) и miR-34bc — / — ; 449 — / — (ось y). Показаны значительно дерегулированные (p = 0,05) гены с log 2 -кратным изменением 0,5 (красный цвет). ( B ) Показан список из 13 генов с повышенной регуляцией с предсказанными сайтами связывания семян miR-34. Также указана функция гена, а также количество сайтов связывания miR-34. ( C ) Идентифицирован анализ экспрессии qRT-PCR репрезентативных генов семейства miR-34, содержащих дерегулированные гены.Нормализованные данные представлены как относительное кратное изменение для miR-34bc — / — ; 449 — / — по сравнению с пахитенными сперматоцитами дикого типа. Показана стандартная ошибка, а звездочка указывает на значительно повышенную экспрессию (P <0,05). Также представлены другие гены, идентифицированные из массива, экспрессия которых изменяется. Данные на всех панелях взяты из четырех биологических повторов каждого генотипа. ( D ) Ландшафтный график обогащения Sylamer для всех 876 слов из 7 нуклеотидов, комплементарных каноническим затравочным областям miRNA мыши.Ось Y представляет собой отсортированный список генов из 21 560 генов, от наиболее активированных до наиболее подавленных в miR-34bc — / — ; 449 — / — пахитенных сперматоцитов. Каждое 7-членное слово было проверено на предмет значительного обогащения 3’UTR генов в этом списке. Слово, соответствующее семейству семейств miR-34 (красный), обогащено активируемыми генами.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.g005

Здесь мы исследовали вклад пути miRNA в постмитотические стадии сперматогенеза.Увеличение экспрессии Dicer, достигающее максимума в сперматоцитах пахитена, указывает на важность этого пути в мейозе, действительно, потеря Dicer приводит к сперматогенным дефектам. Интересно отметить, что возобновление транскрипции во время мейоза происходит, когда клетки входят в пахитены, поэтому высокие уровни Dicer в ней могут потребоваться для обработки всплеска пре-miRNAs для текущего или более позднего использования. В самом деле, набор miRNAs, экспрессируемых в сперматоцитах и ​​круглых сперматидах, очень похож, таким образом, наблюдаемая повышенная экспрессия Dicer может потребоваться для генерации больших количеств miRNA не только для мейоза, но и в дальнейшем.Кроме того, проблемы, связанные с возобновлением транскрипции в пахитеновых клетках, делают необходимым путь miRNA для тонкой настройки экспрессии генов. Это очевидно из нерегулируемой экспрессии гена в miR-34bc — / — ; 449 — / — сперматоцитов и его фенотипических последствий. Наше исследование идентифицирует miR-34b / c и miR-449 как первые локусы miRNA, необходимые для сперматогенеза млекопитающих. Потеря miR-34bc / 449 не блокирует процесс сперматогенеза per se , но нарушает несколько переходов в развитии, приводя к низкому количеству сперматозоидов и сперматозоидам с аберрантной морфологией и подвижностью. Это фенотипические признаки олигоастенотератозооспермии, наиболее частой причины снижения мужской фертильности или бесплодия у людей [37]. Таким образом, наше исследование представляет потерю определенных miRNAs как одно определяющее причинное событие в генезе олигоастенотератозооспермии. Эти наблюдения важны для этиологии этого расстройства, а также для потенциальной будущей основы для молекулярных диагностических и терапевтических стратегий.

Материалы и методы

Штаммы мышей

Для аллеля Dcr FH мы ввели сразу после стартового ATG Dicer , расположенного в экзоне 2, последовательность, кодирующую теги эпитопа Flag-HA-HA (FlagHa 2 ).Для создания этого аллеля была создана нацеленная конструкция, которая содержит плечи гомологии 5 ‘5,1 т.п.н. и 3’ 3,4 т.п.н., кассету loxP , фланкированную neo , помещенную в интрон 2, и последовательность FlagHA 2 , вставленную в экзон 2, как описано над. Для идентификации гомологичных рекомбинантов использовали саузерн-блоттинг геномной расщепленной ДНК SacI , полученной из индивидуальных клонов ES-клеток, с внешним 3′-зондом. Фрагмент ДНК в 7,1 т.п.н. соответствует локусу Dcr дикого типа, интеграция кассетного сайта neo 5 ‘экзона 3 вводит дополнительный сайт SacI , таким образом уменьшая размер фрагмента ДНК SacI , распознаваемого для 5.9 кб. Интеграция метки FlagHA 2 была подтверждена секвенированием целевых клонов. Cre-опосредованное удаление loxP , фланкированного кассеты neo , привело к генерации аллеля FlagHa 2 -Dicer ( Dcr FH ).

miR-34b и miR-34c miRNA происходят из одной некодирующей транскрипционной единицы. Для аллеля потери функции miR-34bc стратегия нацеливания допускает Cre-опосредованную делецию шпилек, которые кодируют как miR-34b, так и miR-34c.Для создания этого аллеля была создана нацеленная конструкция, которая содержит ветви гомологии 5 ‘3,65 т. п.н. и 3′ 4,6 т.п.н., кассету frt , фланкированную кассетой neo с 5 ‘сайтом loxP кодирующей miR-34b / c последовательности и второй сайт loxP 3 ‘. Для идентификации гомологичных рекомбинантов использовали саузерн-блоттинг геномной расщепленной ДНК HindIII , полученной из индивидуальных клонов ES-клеток, с внешним 5′-зондом. Фрагмент ДНК 9 т.п.н. соответствует локусу miR-34b / c дикого типа, интеграция 3 ‘сайта lox P вводит дополнительный сайт HindIII , таким образом уменьшая размер фрагмента ДНК HindIII распознается до 5 кб.Flp-опосредованная и последующая рекомбинация Cre приводит к появлению аллелей поколения miR-34bc flox (miR-34bc Fl ) и miR-34bc null (miR-34bc ) , соответственно.

miR-449a, miR-449b и miR-449c miRNA кодируются последовательностью в 1,6 т.п.н. в интроне размером 20 т.п.н. кодирующего гена Cdc20B . Для создания мышей, лишенных всех miR-449 miRNA, мы заменили шпильки, которые кодируют все miR-449, кассетой loxP , фланкированной neo . Была создана нацеленная конструкция, которая содержит плечи гомологии 5 ‘4,9 т.п.н. и 3’ 4,7 т.п.н., кассету loxP , фланкированную neo , которая заменяет последовательности, кодирующие miR-449a, b и c. Саузерн-блоттинг отдельных геномных ДНК, переваренных BamHI , полученных из клонов ES, с внешним 3′-зондом использовали для идентификации гомологичных рекомбинантов. Фрагмент ДНК длиной 8 т.п.н. соответствует локусу miR-449 дикого типа, интеграция кассеты loxP , фланкированной neo , вводит дополнительный сайт BamHI , тем самым уменьшая размер фрагмента ДНК BamHI , распознаваемого для 6.6 т.п.н. в аллеле-мишени miR-449. Cre-опосредованная рекомбинация удаляет кассету neo , что приводит к образованию единственного рубцового участка loxP , оставляя остальную часть интрона Cdc20B нетронутой. Эта стратегия предназначена для удаления miR-449 без воздействия на ген Cdc20B .

Нацеливающие конструкции Dcr FH , miR-34bc и miR-449 были электропорированы в A9 ES клетки (ESCs) и обработаны для получения мышей, полностью полученных из ESC [41]. Затем мышей, нацеленных на miR-34b / c, скрещивали с трансгенными мышами, экспрессирующими FLP (FLPeR) [42], чтобы удалить frt , фланкированную кассету neo r , что привело к образованию miR-34bc Аллель Fl . Мыши, гетерозиготные по miR-34bc Fl , нацеленные на Dcr и miR-449 нацеленные аллели, были скрещены с Deleter Cre [43] для генерации miR-34b , Dcr FH и miR-449. аллелей соответственно.В этом исследовании анализировали взрослых мышей в возрасте от двух до четырех месяцев со смешанным генетическим фоном C57Bl / 6 и 129. В этом исследовании также использовался аллель Stra8-Cre [29], [30]. Для экспериментов с miR-34bc — / — ; 449 — / — , miR-34bc +/- ; 449 +/- или miR-34bc +/- или miR-449 + / — использовали в качестве контрольных мышей. Эти контрольные животные обычно были однопометниками, но если это было невозможно, использовали контрольных мышей соответствующего возраста. Все мыши были выведены и содержались в отделении биологии мышей EMBL, Монтеротондо в соответствии с действующим итальянским законодательством (статья 9, 27 января 1992 г., № 116) по лицензии Министерства здравоохранения Италии.

Антитела

Мышиное моноклональное антитело против эпитопа HA (Covance HA.11 Clone 16B12) использовали для экспериментов с WB и IF (1-1000 и 1-100 соответственно). Кроличьи поликлональные анти-γh3AX (ICH, ICH-00059) (1-250) использовали для иммунофлуоресценции и в комбинации с РНК для гибридизации in situ .В этом исследовании использовали кроличьи поликлональные анти-Smc1a (Bethyl A300-55A) (1∶10000).

Иммунофлуоресценция

Яички взрослых собирали и фиксировали в 4% параформальдегиде в течение ночи и заливали парафином. Срезы размером 6 мкм вырезали для иммуноокрашивания HA и γh3AX. Срезы подвергали извлечению антигена с использованием пара в течение 30 минут в растворе для демаскировки антигена (Vector Lab), а затем в течение 10 минут подвергали проницаемости при комнатной температуре в 0,1% тритоне-X. Срезы блокировали 30 минут при комнатной температуре в 10% нормальной ослиной сыворотке, 2% BSA и 0.1М глицин (Sigma). Инкубацию первичных антител проводили в течение ночи при 4 ° C в блокирующем буфере. Использовали соответствующие вторичные антитела к Alexa (Invitrogen) (1–1000). Hoechst 33342 (5 мкг / мл) (Sigma) использовали для окрашивания ДНК. Конфокальный микроскоп Leica TCS SP5 использовался для получения всех изображений. Photoshop использовался для кадрирования и других модификаций, которые в равной степени были выполнены на контрольных или экспериментальных образцах.

Гистология и обнаружение апоптозных клеток

Семенники фиксировали в фиксаторе Буэна в течение ночи при температуре 4 ° C, заливали парафином и делали срезы толщиной 8 мкм.Затем срезы окрашивали гематоксилином и эозином или периодной кислотой Шиффа и гематоксилином, используя стандартные методы. Обнаружение апоптотических клеток выполняли на фиксированных параформальдегидом парафиновых срезах семенников с использованием набора для определения гибели клеток in situ (Roche). Затем срезы окрашивали DAPI (5 мкг / мл) (Sigma) для идентификации различных популяций зародышевых клеток.

Выделение зародышевых клеток

популяции зародышевых клеток выделяют и анализируют с помощью FACS точно так, как описано [38], [39], [44].

Анализ экспрессии миРНК и мРНК

РНК

выделяли с использованием Trizol (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. 500 нг общей РНК были помечены и гибридизированы с массивами микроРНК miRCURY LNA V.11 (Exiqon) для профилирования miРНК. Нозерн-блоттинг miRNA выполняли, как описано (Rasmussen, 2010). Для miRNA in situ семенники собирали у животных с перфузией 4% параформальдегидом разного возраста (6 dpp, 8 dpp, 10 dpp, 12 dpp, 14 dpp, 18 dpp и 3 месяца).Ткани дополнительно фиксировали погружением в 4% параформальдегид на ночь, криозащищали 30% сахарозой / PBS, замораживали и делали срезы толщиной 7 мкм на предметные стекла Superfrost Plus. Гибридизацию in situ проводили с использованием LNA-зондов с 3′-DIG-меткой (Exiqon) для mir-34c. Гибридизацию со скремблирующими LNA-зондами использовали в качестве отрицательного контроля. Вкратце, срезы расщепляли протеиназой К в течение 5 минут, ацетилировали и гибридизовали с зондами в 50% формаммиде, 5 × SSC, 5 × растворе Денхардта, 500 мкг / мл ДНК спермы лосося и 250 мкг / мл тРНК в течение ночи при 52 ° C. .5 ° С. После пост-гибридизационных промывок 50% формаммидом, 2 × SSC при 52,5 ° C и 2 × SSC при температуре окружающей среды срезы затем блокировали и инкубировали в течение ночи с анти-дигоксигенином-POD (Roche; при 1-500). Обнаружение сигнала было выполнено с использованием системы TSA-Plus Fluorescein. Затем слайды инкубировали с кроличьими анти-γh3AX (1-250) и козьими анти-кроличьими антителами Alexa 546 в качестве вторичных антител. Для miRNA qRT PCR 10 нг общей РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора для обратной транскрипции TaqMan MicroRNA (4366569, Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя.qRT-PCR выполняли с использованием TaqMan Universal Master Mix II, без UNG (4440040; Invitrogen). Для обратной транскрипции и анализа микроРНК TaqMan (Applied Biosystem), специфичных для qRT-PCR, использовали mir-34a, mir-34b, mir-34c, mir-449a и контрольную snoRNA142.

Для анализа микроматрицы мРНК общая РНК была выделена из FACS-отсортированных пахитеновых клеток из контроля и mir-34bc — / — ; 449 — / — мышей-самцов. РНК гибридизовали с массивами Mouse Gene 2.0 ST от Affymetrix.Данные были проанализированы с R / bioconductor с использованием пакета limma [45], [46]. Данные были нормализованы и скорректированы с учетом фона с использованием функции меры выражения Robust Multi-Array Average [47] (rma) из пакета Affymetrix. Обогащение связывающих мотивов miRNA анализировали с помощью Sylamer [48].

Регистрационный номер

Все данные массива хранятся в ArrayExpress под регистрационным номером E-MTAB-2668 и E-MTAB-2676.

Вспомогательная информация

Рисунок S1.

( A ) Схематический обзор первой волны сперматогенеза и послеродовых дней (dpp), когда указанные популяции зародышевых клеток наблюдаются впервые. ( B ) Клеточная экспрессия miR-34c (зеленый) демонстрируется гибридизацией in situ на срезах семенников мышей 14 dpp, срезы контрастировали с антителом против γh3AX (красный) и DAPI (синий) для точной определить мейотическую стадию. Показаны изолированные клетки указанной стадии. Шкала шкалы = 10 мкм.( C ) Показана экспрессия miR-34c (зеленый), представленная на (B). Показаны ступенчатые канальцы. Шкала шкалы = 10 мкм. Сокращения: B сперматогонии типа B, pL, прелептотен; L, лептотен; Z — зиготена; P, пахитен; D, диплотен; МИ, метафаза I; RS — круглая сперматида и ES — удлиненная сперматида. Репрезентативные изображения одного из трех независимых экспериментов показаны на B – C.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.s001

(TIF)

Рисунок S2.

( A ) Обзор локуса miR-34bc (верхняя панель).Указаны положения ДНК, кодирующей pre-miR-34b и pre-miR-34c. Направляющий вектор, используемый для введения сайтов loxP в локус miR-34bc, и схематическая карта целевой miR-34bc до и после Flp и Cre-опосредованной рекомбинации показаны. Заштрихованные треугольники представляют сайтов lox P и frt сайтов, как указано. Заштрихованные прямоугольники указывают положение генов маркеров селекции неомицина (Neo) и токсина дифтерии A (DTA). Сайты рестрикции HindIII (H) указаны, а также соответствующие Саузерн-фрагменты, обнаруженные 5′-зондом.( B ) Представлено нацеливание на MiR-34b / c, диагностированное с помощью саузерн-блоттинга ДНК, полученной из хвоста, расщепленной HindIII. ( C ) Показаны уровни miR-34b / c и других miRNA семейства miR-34 в семенниках указанных генотипов, определенные с помощью qRT-PCR. ( D ) Обзор области кодирования miR-449 (верхняя панель). Положение ДНК, кодирующей pre-miR-449a, pre-miR-449b и pre-miR-449c, указано внутри интрона Cdc20B. Направляющий вектор, используемый для введения loxP , фланкированной кассеты неомицина ( Neo ), в локус miR-449 и схематическая карта нацеленной miR-449 до и после Cre-опосредованной рекомбинации. Закрашенные прямоугольники представляют экзоны Cdc20B. Остальные функции такие же, как в (A). ( E ) Представлено нацеливание на MiR-449, диагностированное с помощью саузерн-блоттинга хвостовой ДНК, расщепленной BamHI. ( F ) Показаны уровни miR-449a и других miRNA семейства miR-34 в семенниках указанных генотипов, определенные с помощью qRT-PCR. ( G ) Изображен вес семенников из контроля (Ctl), miR-34bc — / — и miR-449 — / — самцов мышей. (n = 12 для контроля, n = 5 для miR-34bc — / — и miR-449 — / — ).( H ) Показано количество детенышей на пробку из контроля (Ctl), miR-34bc — / — и miR-449 — / — самцов мышей, спарившихся с самками дикого типа. (n = 10 для контроля, n = 3 для miR-34bc — / — ; n = 5 для miR-449 — / — ). ( I ) Показаны репрезентативные изображения окрашенных гематоксилином и эозином срезов семенников из контрольной группы взрослых, miR-34bc — / — и miR-449 — / — . Масштабная линейка = 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1004597.s002

(TIF)

Благодарности

Мы с благодарностью выражаем признательность Д. Бильбао и В. Бенешу за поддержку основных предприятий EMBL FACS и Genecore, соответственно. Аллели Dcr FH , miR-34 Fl и miR-449 будут депонированы в EMMA (www.infrafrontier.eu) и будут доступны в свободном доступе без сотрудничества. .

Вклад авторов

Задумал и разработал эксперименты: DO.Проведены эксперименты: SC MDG. Проанализированы данные: ГК ЦРТ КДР ММ. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: SC MDG. Написал бумагу: DO. Выполнено / проанализировано большинство экспериментов: SC MDG. Выполнен скрининг экспрессии miRNA: KDR. Создан аллель FH-DCR: CM. Поддерживаемый SC и ЦРТ: CA. Осуществляли окрашивание miRNA in situ: EP. Проанализированы данные экспрессии гена: КДР ММ.

Ссылки

  1. 1.
    Эдди Е.М. (2002) Экспрессия генов мужских половых клеток. Недавний Prog Horm Res 57: 103–128.
  2. 2.
    de Rooij DG, Russell LD (2000) Все, что вы хотели знать о сперматогониях, но боялись спросить. Дж. Андрол 21: 776–798.
  3. 3.
    Handel MA, Schimenti JC (2010) Генетика мейоза млекопитающих: регуляция, динамика и влияние на фертильность. Нат Рев Женет 11: 124–136.
  4. 4.
    Monesi V (1964) Синтез рибонуклеиновой кислоты во время митоза и мейоза в семенниках мышей. J Cell Biol 22: 521–532.
  5. 5.
    Паронетто М.П., ​​Мессина В., Барчи М., Геремия Р., Ричард С. и др.(2011) Sam68 отмечает транскрипционно активные стадии сперматогенеза и модулирует альтернативный сплайсинг в мужских половых клетках. Nucleic Acids Res 39: 4961–4974.
  6. 6.
    O’Carroll D, Schaefer A (2013) Общие принципы биогенеза и регуляции miRNA в головном мозге. Нейропсихофармакология 38: 39–54.
  7. 7.
    Ли Й, Ан С, Хан Дж, Чой Х, Ким Дж и др. (2003) Ядерная РНКаза III Дроша инициирует процессинг микроРНК. Природа 425: 415–419.
  8. 8.Landthaler M, Yalcin A, Tuschl T (2004) Ген 8 критической области человеческого синдрома Ди Джорджи и его гомолог D. melanogaster необходимы для биогенеза miRNA. Curr Biol 14: 2162–2167.
  9. 9.
    Bernstein E, Caudy AA, Hammond SM, Hannon GJ (2001) Роль бидентатной рибонуклеазы на этапе инициации РНК-интерференции. Nature 409: 363–366.
  10. 10.
    Hutvagner G, McLachlan J, Pasquinelli AE, Balint E, Tuschl T. и др. (2001) Клеточная функция фермента РНК-интерференции Dicer в созревании малой временной РНК let-7.Наука 293: 834–838.
  11. 11.
    Yi R, Qin Y, Macara IG, Cullen BR (2003) Exportin-5 опосредует ядерный экспорт пре-микроРНК и коротких шпилечных РНК. Гены Дев 17: 3011–3016.
  12. 12.
    Мейстер Г., Ландталер М., Петерс Л., Чен П.Й., Урлауб Н. и др. (2005) Идентификация новых белков, связанных с аргонавтом. Curr Biol 15: 2149–2155.
  13. 13.
    Schwarz DS, Hutvagner G, Haley B, Zamore PD (2002) Доказательства того, что миРНК функционируют как проводники, а не праймеры, в путях РНКи дрозофилы и человека.Mol Cell 10: 537–548.
  14. 14.
    Гримсон А., Фарх К.К., Джонстон В.К., Гаррет-Энджеле П., Лим Л.П. и др. (2007) Специфичность нацеливания микроРНК у млекопитающих: детерминанты, выходящие за рамки спаривания семян. Mol Cell 27: 91–105.
  15. 15.
    Doench JG, Sharp PA (2004) Специфичность отбора мишеней микроРНК при репрессии трансляции. Genes Dev 18: 504–511.
  16. 16.
    Амброс В., Бартель Б., Бартель Д.П., Бердж С.Б., Кэррингтон Дж.С. и др. (2003) Единая система аннотации микроРНК.РНК 9: 277–279.
  17. 17.
    Бем-Ансмант И., Ревинкель Дж., Дёркс Т., Старк А., Борк П. и др. (2006) для деградации мРНК с помощью miRNAs и GW182 требуются как CCR4: NOT deadenylase, так и комплексы декапирования DCP1: DCP2. Genes Dev 20: 1885–1898.
  18. 18.
    Orban TI, Izaurralde E (2005). Для распада мРНК, на которые нацелены RISC, требуется XRN1, комплекс Ski и экзосома. РНК 11: 459–469.
  19. 19.
    Фарх К.К., Гримсон А., Ян С., Льюис Б.П., Джонстон В.К. и др. (2005) Широко распространенное влияние микроРНК млекопитающих на репрессию и эволюцию мРНК.Наука 310: 1817–1821.
  20. 20.
    Бэк Д., Виллен Дж., Шин С., Камарго Ф. Д., Гиги С. П. и др. (2008) Влияние микроРНК на выход белка. Природа 455: 64–71.
  21. 21.
    Lim LP, Lau NC, Garrett-Engele P, Grimson A, Schelter JM и др. (2005) Анализ микроматриц показывает, что некоторые микроРНК подавляют большое количество целевых мРНК. Природа 433: 769–773.
  22. 22.
    Ян Дж. С., Маурин Т., Робин Н., Расмуссен К. Д., Джеффри К. Л. и др. (2010) Консервативное позвоночное mir-451 обеспечивает платформу для Dicer-независимого, Ago2-опосредованного биогенеза микроРНК.Proc Natl Acad Sci U S A 107: 15163–15168.
  23. 23.
    Cheloufi S, Dos Santos CO, Chong MM, Hannon GJ (2010) Независимый от дицера путь биогенеза miRNA, который требует катализа Ago. Природа 465: 584–589.
  24. 24.
    Cifuentes D, Xue H, Taylor DW, Patnode H, Mishima Y и др. (2010) Новый путь процессинга miRNA, независимый от Dicer, требует каталитической активности Argonaute2. Science 328: 1694–1698.
  25. 25.
    Babiarz JE, Ruby JG, Wang Y, Bartel DP, Blelloch R (2008) ES-клетки мыши экспрессируют эндогенные shRNA, siRNA и другие микропроцессорные независимые, Dicer-зависимые малые РНК.Genes Dev 22: 2773–2785.
  26. 26.
    Ватанабэ Т., Тотоки Ю., Тойода А., Канеда М., Курамоти-Миягава С. и др. (2008) Эндогенные миРНК из естественных дцРНК регулируют транскрипты в ооцитах мышей. Природа 453: 539–543.
  27. 27.
    Там ОХ, Аравин А.А., Стейн П., Жирар А., Мерчисон Е.П. и др. (2008) Малые интерферирующие РНК, происходящие из псевдогенов, регулируют экспрессию генов в ооцитах мышей. Природа 453: 534–538.
  28. 28.
    Хаяши К., Чува де Соуза Лопес С.М., Канеда М., Тан Ф., Хайкова П. и др.(2008) Биогенез микроРНК необходим для развития первичных зародышевых клеток и сперматогенеза мышей. PLoS One 3: e1738.
  29. 29.
    Sadate-Ngatchou PI, Payne CJ, Dearth AT, Braun RE (2008) Активность Cre-рекомбиназы, специфичная для постнатальных, премейотических мужских половых клеток у трансгенных мышей. Бытие 46: 738–742.
  30. 30.
    Хоббс Р.М., Фагуни С., Папа А., Вебстер К., Альтруда Ф. и др. (2012) Функциональный антагонизм между Sall4 и Plzf определяет предшественников зародышевой линии. Стволовые клетки клетки 10: 284–298.
  31. 31.
    Йи Р., О’Кэрролл Д., Пазолли Х.А., Чжан З., Дитрих Ф.С. и др. (2006) Морфогенез в коже регулируется дискретными наборами дифференциально экспрессируемых микроРНК. Нат Генет 38: 356–362.
  32. 32.
    Бао Дж, Ли Д., Ван Л, Ву Дж, Ху Й и др. (2012) МикроРНК-449 и микроРНК-34b / c дублируют функции в семенниках мышей, воздействуя на путь транскрипционного фактора E2F и белка ретинобластомы (E2F-pRb). J Biol Chem 287: 21686–21698.
  33. 33.
    He L, He X, Lim LP, de Stanchina E, Xuan Z и др. (2007) Компонент микроРНК в супрессорной сети p53. Природа 447: 1130–1134.
  34. 34.
    Choi YJ, Lin CP, Ho JJ, He X, Okada N и др. (2011) miR-34 miRNAs создают барьер для репрограммирования соматических клеток. Nat Cell Biol 13: 1353–1360.
  35. 35.
    Консепсьон С.П., Хан Ю.С., Му П, Бонетти С., Яо Э. и др. (2012) Интактные p53-зависимые ответы у мышей с дефицитом miR-34. PLoS Genet 8: e1002797.
  36. 36.
    Бун Р.А., Иекуши К., Лехнер С., Сигер Т., Фишер А. и др.(2013) MicroRNA-34a регулирует старение и функцию сердца. Природа 495: 107–110.
  37. 37.
    Хирш А. (2003) Мужская бесплодие. BMJ 327: 669–672.
  38. 38.
    Bastos H, Lassalle B, Chicheportiche A, Riou L, Testart J, et al. (2005) Проточная цитометрическая характеристика жизнеспособных мейотических и постмейотических клеток с помощью Hoechst 33342 в сперматогенезе мышей. Цитометрия A 65: 40–49.
  39. 39.
    Ди Джакомо М., Комаццетто С., Саини Х. , Де Фацио С., Карриери С. и др.(2013) Множественные эпигенетические механизмы и путь piRNA усиливают молчание LINE1 во время сперматогенеза взрослых. Mol Cell 50: 601–608.
  40. 40.
    Мартин-де-Лара Ф, Санчес-Апарисио П., Ариас де ла Фуэнте С, Рей-Кампос Дж. (2008) Биологические эффекты сверхэкспрессии FoxJ2. Transgenic Res 17: 1131–1141.
  41. 41.
    Де Фацио С., Бартоничек Н., Ди Джакомо М., Абреу-Гуджер С., Санкар А. и др. (2011) Эндонуклеазная активность Mili способствует амплификации пиРНК, которая подавляет элементы LINE1.Природа 480: 259–263.
  42. 42.
    Farley FW, Soriano P, Steffen LS, Dymecki SM (2000) Широко распространенная экспрессия рекомбиназы с использованием мышей FLPeR (flipper). Бытие 28: 106–110.
  43. 43.
    Schwenk F, Baron U, Rajewsky K (1995) Cre-трансгенная линия мышей для повсеместной делеции сегментов гена, фланкированных loxP, включая делецию в зародышевых клетках. Nucleic Acids Res 23: 5080–5081.
  44. 44.
    Махадевайя С.К., Тернер Дж. М., Баудат Ф., Рогаку Е.П., де Бур П. и др.(2001) Двухцепочечные разрывы рекомбинационной ДНК у мышей предшествуют синапсису. Нат Генет 27: 271–276.
  45. 45.
    Смит Г.К. (2004) Линейные модели и эмпирические байесовские методы для оценки дифференциальной экспрессии в экспериментах с микрочипами. Stat Appl Genet Mol Biol 3: Статья3.
  46. 46.
    Smyth GK, Michaud J, Scott HS (2005) Использование репликативных пятен внутри массива для оценки дифференциальной экспрессии в экспериментах с микроматрицами. Биоинформатика 21: 2067–2075.
  47. 47.Иризарри Р.А., Хоббс Б., Коллин Ф., Бизер-Барклай Ю.Д., Антонеллис К.Дж. и др. (2003) Исследование, нормализация и обобщение данных об уровне зондов с массивом олигонуклеотидов высокой плотности. Биостатистика 4: 249–264.
  48. 48.
    van Dongen S, Abreu-Goodger C, Enright AJ (2008) Обнаружение связывания микроРНК и нецелевых эффектов siRNA по данным экспрессии. Nat Методы 5: 1023–1025.

Да, низкое количество сперматозоидов излечимо. Вот его причины, симптомы и естественные средства

Если вы изо всех сил пытались зачать ребенка, но безуспешно, есть вероятность, что у вас может быть низкое количество сперматозоидов, то есть ваша сперма содержит меньше сперматозоидов, чем обычно.

Также называется олигоспермией. Считается, что у человека низкое количество сперматозоидов, если у него менее 15 миллионов сперматозоидов на миллилитр спермы.

Низкое количество сперматозоидов снижает шансы на оплодотворение яйцеклетки вашего партнера и, следовательно, снижает шансы на беременность. Однако верно и то, что многие мужчины с низким количеством сперматозоидов также могут иметь детей.

Причины низкого количества сперматозоидов

Уменьшение количества сперматозоидов может быть вызвано следующими тремя факторами:

Медицинские проблемы

«Состояние, называемое варикоцеле, вызывает набухание вен, которые дренируют яички, и является наиболее частым явлением. частая и обратимая причина низкого количества сперматозоидов.Определенные инфекции могут мешать выработке спермы. Лекарства, вызывающие проблемы с эякуляцией, рак и опухоли, хирургическое вмешательство, неопущение яичек, гормональный дисбаланс, дефекты канальцев, транспортирующих сперму, определенные хромосомные дефекты и т. Д. — все это другие медицинские причины олигоспермии », — говорит доктор Нандита Палшеткар из Мумбаи является избранным президентом Федерации обществ акушерства и гинекологии Индии.

Факторы окружающей среды

Это включает воздействие промышленных химикатов и радиации, а также перегрев яичек.

Производство спермы у человека зависит от температуры яичек. Именно мошонка регулирует температуру яичек. Однако в условиях экстремальной жары механизмов естественного охлаждения мошонки может быть недостаточно, чтобы предотвратить повышение температуры яичек. Это повышение температуры влияет как на качество, так и на количество производимой спермы.

Не только количество сперматозоидов и сексуальная энергия, стресс может вызвать множество проблем, таких как увеличение веса, выпадение волос, проблемы с кожей и многое другое.(Shutterstock)

Проблемы со здоровьем и образом жизни

«Употребление наркотиков, употребление алкоголя и курение, нездоровое питание, малоподвижный образ жизни, ношение тесной одежды, эмоциональный стресс и вес — это факторы, которые подпадают под эту категорию», — объясняет д-р Нандита.

Как лечить низкое количество сперматозоидов?

Если у вас низкое количество сперматозоидов, эти изменения помогут вылечить это состояние.

Занимайтесь физической активностью

«Важно каждый день какое-то время заниматься спортом.Исследования показывают, что существует прямая связь между потерей веса и физическими упражнениями и улучшением или увеличением количества сперматозоидов », — советует д-р Хришикеш Д Пай, который живет в Мумбаи и является медицинским директором Bloom IVF Group.

Бросьте курить и пить

«Это не только приводит к снижению количества сперматозоидов, но и влияет на общее сексуальное благополучие человека», — говорит д-р Пай. «Курение повреждает кровеносные сосуды, нарушая приток крови к половому члену, тем самым вызывая эректильную дисфункцию.Закупорка кровеносных сосудов также сказывается на мужественности. Хотя организму требуется время, чтобы восстановиться после отказа от курения, адекватные упражнения и здоровое питание могут помочь ускорить улучшение зрелости », — объясняет д-р Анил Мандхани из Гургаона, председатель института урологии и андрологии, института почек и урологии Medanta — The Medicity.

Избегайте чрезмерного употребления лекарств

Низкое количество сперматозоидов — один из нескольких побочных эффектов передозировки рецептурных препаратов. Возможно, вы захотите узнать у своего врача, принимаете ли вы определенные лекарства, из-за которых количество сперматозоидов могло снизиться или пострадать. Например, диуретики могут вызвать обезвоживание, что может привести к уменьшению объема семенной жидкости.

Снижение стресса

Повышенный стресс может заставить организм принимать защитные меры и сберегать энергию. В такие времена тело меньше сосредотачивается на воспроизводстве и больше на выживании. Не только количество сперматозоидов и сексуальная энергия, стресс может вызвать множество проблем, таких как увеличение веса, выпадение волос, проблемы с кожей и многое другое.

Ешьте здоровую пищу

Откажитесь от нездоровой пищи и сосредоточьтесь на свежих фруктах, овощах и цельнозерновых продуктах.Определенные продукты, такие как грецкие орехи, цитрусовые, большая часть рыбы, темный шоколад, чеснок, бананы, брокколи, куркума, большая часть листовой зелени, а также ферментированные орехи и семена, хороши для увеличения количества сперматозоидов.

Увеличьте потребление витамина D и кальция

Есть исследования, показывающие прямую связь между уровнями витамина D и кальция и увеличением количества сперматозоидов. В журнале Reproductive Biology and Endocrinology было исследование, в котором говорилось, что уровень витамина D у мужчины связан с его успешностью, пока пара пытается зачать ребенка.Человеческое бесплодие возникает, когда пара не может забеременеть после года незащищенного полового акта.

Следуйте @htlifeandstyle, чтобы узнать больше

Советы и новости по фертильности | CREATE Fertility

Есть много разных факторов, которые могут повлиять на вашу способность зачать ребенка. Если у вас возникли трудности, то понимание проблемы — первый шаг к поиску решения. Если вам и вашему партнеру поставили диагноз СПКЯ и низкая подвижность сперматозоидов, то это не повод для паники.Есть много других пар, похожих на вас, и вам доступно множество вариантов.

Фактически, около 20% женщин страдают синдромом поликистозных яичников (СПКЯ), и, как сообщает HFEA, «около половины пар, у которых возникают проблемы с зачатием, причина бесплодия связана со спермой».

Что такое СПКЯ и что он означает для фертильности?

СПКЯ — распространенное заболевание, поражающее яичники женщины. Если у женщины СПКЯ, это означает, что у нее большое количество безвредных кист яичников, подвергшихся «фолликулярной остановке».

В нормальном яичнике яйцеклетка развивается внутри фолликула и выделяется из него. Однако у женщин с СПКЯ многие фолликулы недоразвиты, что означает, что яйцеклетка не может быть выпущена, и поэтому овуляция не может произойти. Это представляет собой гормональный дисбаланс, который, помимо других симптомов, может вызывать нерегулярный менструальный цикл и затруднения при зачатии.

«Женщинам с такими заболеваниями, как СПКЯ (синдром поликистозных яичников), может быть предоставлена ​​экспертная информация для улучшения овуляции и содействия естественному зачатию.Тестирование дает людям знания и силу для понимания своей ситуации и принятия решений на будущее, основанных на научно достоверных результатах ». Д-р Гита Наргунд, медицинский директор CREATE, в Huffington Post

Подробнее о СПКЯ можно прочитать здесь.

Хорошая новость заключается в том, что женщины с СПКЯ обычно хорошо реагируют на лечение ЭКО. На самом деле самая большая проблема этих пациентов заключается в том, что они могут слишком хорошо реагировать на стимуляцию, что подвергает их риску синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ).В CREATE многие пациенты с СПКЯ проходят лечение с помощью наших протоколов мягкой стимуляции, которые включают 5-9 дней приема стимулирующих препаратов, а не 4-5 недель, которые используются при обычном ЭКО. Преимущество этого подхода состоит в том, что он в значительной степени позволяет избежать самых серьезных рисков СГЯ, и, кроме того, этот более легкий режим также имеет дополнительное преимущество в том, что организм меньше подвергается стрессу и, надеюсь, более восприимчив к имплантации.

Что такое низкое количество сперматозоидов и что оно означает для фертильности?

Низкое количество сперматозоидов означает, что сперма содержит меньше сперматозоидов, чем обычно, и поэтому шансы на зачатие ниже во время полового акта.Однако мужское бесплодие является результатом не только низкого количества сперматозоидов; также могут быть проблемы с морфологией и / или закупорки, препятствующие доставке спермы.

Более того, несмотря на то, что он является причиной 50% проблем бесплодия (и является единственной причиной примерно в 30% случаев), мужское бесплодие часто игнорируется или затмевается разговорами о женском бесплодии. Шокирующая правда, учитывая, что количество мужской спермы упало на целых 50% за последние 40 лет.

Как определяется низкое количество сперматозоидов?

  • Менее 15 миллионов сперматозоидов на мл спермы соответствует низкому количеству сперматозоидов
  • Менее 1 миллиона / мл спермы подходит для очень низкого количества сперматозоидов
  • Подвижность сперматозоидов (движение и плавание сперматозоидов) менее 32% считается низкой
  • Сперма, которая соответствует требованиям к 97% или более аномальной морфологии сперматозоидов (выявленной при просмотре спермы под микроскопом по дефектам головы или хвоста), считается сперматозоидом с низким количеством сперматозоидов

Щелкните здесь, чтобы получить дополнительную информацию о мужском бесплодии.

У моего мужа низкая подвижность сперматозоидов, а у меня СПКЯ: какие у меня варианты?

Оба условия встречаются редко, но не редкость. Если у вашего партнера низкая подвижность сперматозоидов и у вас СПКЯ, вам доступно множество вариантов, в том числе:

Пожалуйста, свяжитесь с нами, чтобы узнать о наиболее подходящем для вас лечении.

В чем разница между ЭКО и ИКСИ?

ИКСИ — это лабораторный метод, при котором один сперматозоид вводится непосредственно в яйцеклетку.При ЭКО яйцеклетка и несколько сперматозоидов остаются в чашке для самопроизвольного оплодотворения. Вы можете прочитать больше об этом здесь.

Как ЭКО может решить ваши проблемы с фертильностью?

Было много успешных случаев ЭКО у пациентов, страдающих СПКЯ и низким количеством сперматозоидов. Это связано с тем, что ЭКО позволяет мужчине и женщине максимизировать свои шансы на оплодотворение спермой и яйцеклеткой и принимает во внимание ваши конкретные обстоятельства.

Например, мягкое ЭКО работает параллельно с естественным циклом женщины и использует более низкие дозы препаратов для бесплодия, чтобы собрать 6-10 яйцеклеток высокого качества.Меньшее количество лекарств и упор на качество, а не на количество означает, что женщины с нормальным запасом яйцеклеток, СПКЯ или эндометриозом подходят для легкого ЭКО, поскольку это лечение снижает риск СГЯ, к которому может привести лечение с высокой стимуляцией.

Если вам интересно или интересно лечение бесплодия, которое предлагает CREATE Fertility, свяжитесь с нашей дружной командой сегодня. Вы также можете записаться на консультацию по лечению бесплодия, на которой наши опытные консультанты предоставят вам и вашему партнеру индивидуальный обзор и план лечения бесплодия.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *