Что такое антитела к хгч: Антитела к хорионическому гонадотропину человека (анти-ХГЧ IgG и анти-ХГЧ IgM)

Содержание

Антитела к ХГЧ IgG/ IgM – Семейная клиника у дома

Синтез ХГЧ преимущественно осуществляется синцитиальным слоем трофобласта во время беременности, в низких концентрациях он выделяется в гипофизе. Основное количество циркулирующего ХГЧ метаболизируется клетками печени, около 20 % выводится с мочой. Гормон поддерживает активность и существование желтого тела, принимая эту роль от лютеинизирующего гормона через 6-8 дней после овуляции. Он является основным гормоном ранней беременности и стимулирует развитие трофобласта. В норме при беременности в период между 2-й и 5-й неделей количество бета-ХГЧ удваивается каждые 1,5 суток. При многоплодной беременности оно увеличивается пропорционально числу плодов. Максимума уровень ХГЧ достигает на 10-11-ю неделю, а затем постепенно снижается. Кроме того, ХГЧ стимулирует продукцию эстрогенов и слабых андрогенов клетками яичников и способствует развитию функциональной активности самого хориона, а в дальнейшем и плаценты, которая образуется в результате созревания и разрастания хориональной ткани. У мужчин ХГЧ стимулирует выработку тестостерона в яичках.

С 8-10 недель беременности её развитие зависит уже от гормональной активности плаценты. Именно хорионический гонадотропин снижает иммунную активность материнского организма, предотвращая отторжение плода как гомотрансплантата.

Антитела к хорионическому гонадотропину блокируют его активность со снижением выработки гормонов фетоплацентарного комплекса – плацентарного лактогена, эстрадиола, прогестерона, что создаёт угрозу самопроизвольного прерывания беременности. Они оказывают большое влияние на его функциональность и угнетают выработку других гормонов. Это приводит к развитию ДВС-синдрома, свидетельствующего об угрозе самопроизвольного прерывания беременности на ранних сроках или гибели плода во втором и третьем триместрах. Также возможно развитие хронического ДВС-синдрома с наклонностью к гиперкоагуляции, когда в плацентарных сосудах формируются множественые тромбозы с фетоплацентарной недостаточностью и отслойкой плаценты. Повреждённая плацента в таком случае не препятствует проникновению в циркуляцию плода токсичных продуктов, что приводит к внутриутробной гибели плода.

Взятие крови производится натощак (не менее 8 и не более 14 ч голодания). Можно пить воду без газа.
Воздержаться от курения за 30 минут.
Прием лекарств и необходимость их отмены следует обсудить с врачом за 7-10 дней до сдачи крови.
Физиотерапевтическое лечение, инструментальные обследования нужно проводить после процедуры забора биоматериала.

Референсные значения: отрицательный
Наличие антител к ХГЧ может являться аутоиммунным фактором привычного выкидыша или причиной бесплодия.

При обнаружении антител класса IgG необходимо повторить анализ через 2-3 недели. Во время беременности или протокола ЭКО диагностическое значение имеет именно рост титра анти-ХГЧ IgG.

Понижение показателя теста диагностически значимо при контроле эффективности искусственного аборта. Если процедура проведена успешно, через несколько суток определяется снижение уровня хорионического гонадотропина и антител к нему.

Анализ на анти-ХГЧ (антитела к хорионическому гонадотропину человека) — «Не так страшен зверь, как счет за консультацию у гематолога. Можно выносить и родить с анти-хгч.»

Я часто отшучиваюсь, что у меня аллергия на беременность, вот и не рожаю. Многие думают, что это просто шутка. Честно говоря, до определенного момента в жизни я и не знала, что есть даже просто анализ крови на ХГЧ, какой там анти-ХГЧ. Кстати, от знаний новых легче не стало, ибо клиник даже по Москве, которые делают такой анализ на пальцах можно пересчитать, а снимается синдром анти-ХГЧ по факту копеечными таблетками. Так что, девочки, которые ЗБ и невынашиванием мучаются, спросите своего лечащего врача, обследуйтесь.

 

Немного для тех, кто не в теме.

Хорионический гонадотропин человека – гормон, вырабатываемый тканями хориона после имплантации эмбриона. У мужчин и небеременных женщин он синтезируется некоторыми видами опухолей. Основные функции – стимуляция желтого тела и поддержание нормального уровня прогестерона, предупреждение отслойки эндометрия и самопроизвольного прерывания беременности. При патологическом иммунном ответе материнского организма в крови появляются антитела к ХГЧ – иммуноглобулины, связывающиеся с гормоном и нарушающие его активность. В итоге желтое тело становится недостаточно функциональным, нарушается синтез прогестерона и эстрадиола, поддерживающих нормальную беременность.

 

Появление антител к ХГЧ является симптомом иммунных нарушений в организме женщины. Данный фактор препятствует наступлению беременности и ее нормальному течению. Точная причина этого отклонения не выявлена, но имеется несколько факторов риска, которые могут привести к такому состоянию.

Показания

Анализ на антитела к ХГЧ наиболее широко применяется для мониторинга беременности, диагностики бесплодия. Показания:

  • Бесплодие. Исследование назначается при подозрении на бесплодие. Выявляет иммунологические причины, препятствующие наступлению оплодотворения, имплантации эмбриона.
  • Диагностика осложнений беременности. Тест показан женщинам с отягощенным анамнезом: выкидышами, случаями внутриутробной гибели плода в анамнезе. Также он назначается беременным с аутоиммунными заболеваниями – механизм выработки антител «знаком» организму, риск формирования иммунологического ответа выше. Периодически исследование анти-ХГЧ выполняется после успешной процедуры ЭКО – в процессе искусственного оплодотворения вводятся препараты с гонадотропином, вероятность выработки специфических иммуноглобулинов к «чужому» гормону выше.
  • Диагностика пороков развития плода. Анализ выполняется в рамках комплексной диагностики, показан при наличии у беременной детей с пороками развития, при отклонениях в результатах скрининговых обследований.
  • Контроль успешности искусственного аборта. Тест на анти-ХГЧ производится вместе с исследованием гормонов через несколько дней после процедуры прерывания. Показатель используется для контроля эффективности аборта.

Анализ может использоваться как дополнительный метод мониторинга и контроля лечения трофобластических опухолей у женщин, злокачественных новообразований яичек и простаты у мужчин. Целесообразность проведения исследования определяется врачом индивидуально.

 

Появление в организме антител к ХГЧ (или по-другому, сенсибилизация к ХГЧ) является аутоиммунным фактором, который приводит к изменению вышеуказанных процессов и к угрозе прерывания беременности. Антитела нарушают связывание хорионического гонадотропина с рецепторами желтого тела, снижают выработку других гормонов, необходимых для развития плода, способствуют возникновению ДВС-синдрома (нарушение свертываемости крови, плацентарная недостаточность и тромбоз сосудов плаценты) и оказывают повреждающее действие непосредственно на эмбриональные клетки.

 

С чего всё началось.

 

Решили с мужем, что готовы к детям. Вперед. Помню, как радовалась первому полосатому тесту. Да! Второй месяц и получилось! На прием к врачу записалась, а тут женские дни, больнючие еще такие, обильные. Решила, что тест просто врет. Так реально бывает. Я не придала значения. Полосатых тестов за год было штук 5-6, не помню. Но каждый раз пока я отпрошусь с работы, пока запишусь к врачу, уже и повода, вроде, нет идти.

 

Через год обратилась в местную ЖК, сдала гормоны, назначили пропить лекарства. На гормонах полосатые тесты были, «задержки» стали больше на неделю, а кровотечения сильнее, больнее. На 4 полосатом тесте меня поздравили с беременностью. На узи сроки не совпадали на неделю-две. Гормоны увеличили. Прошло пару недель. Я уже давно всем радостно поведала о долгожданном счастье. Через неделю пошли выделения. Гормонов ударную дозу. Потом бесконечные узи, я не верила, люди ошибаются. Сдалась с температурой под 40, интоксикацией и напутствием «сдохнешь же, дура».

 

Потом лечилась. По кругу. Врачи разводили руками, проверили под микроскопом и меня, и мужа. Диагнозы разные ставили. Меня даже к Матроне в храм занесло, хоть я и религия далеки, а там беременная девушка попросила помочь, рассказала об больнице, где лечилась. Я решила попробовать, терять нечего (про больницу отзыв). Назначили кучу анализов, потом уточнение, лечение. Мне очень сильно повезло. Врач назначила дополнительно еще дексаметазон и к гематологу в другой профильный центр.

 

Анализ на ани-ХГЧ.

 

Гематолог хмурилась. Есть чему. Скажу так, анти-ХГЧ не бывает единственной проблемой, он всегда с чем-то идет. Аутоиммунные заболевания такие. Знаете, мне сильно повезло с подозрительным доктором. Мой вечный пограничный итог — 4-5 недель. Полосатый тест, я уже не радовалась вообще, да и особо ни на что не надеялась, наступает момент, что ты перегорела, уже край.

 

Гематолог послала на сдачу анти-ХГЧ. На тот момент в Москве еще была огромная проблема найти лабораторию, где берут анализ. В начале 2014 года их можно было по пальцам на одной руке сосчитать. ХГЧ все готовы, а вот что такое анти-ХГЧ? Стоимость была около 2,5 тысяч. Мне нужны были не только цифры, а сама динамика хоть раз в неделю пару месяцев. Сейчас больше стало центров, где можно сдать, еще и цены снизили.

 

Анализ на анти-ХГЧ (антитела к хорионическому гонадотропину человека)

Это результат в беременности на дексаметазоне. Почти норма. Выдыхаем.

 

Анализ на анти-ХГЧ (антитела к хорионическому гонадотропину человека)

Это мне от гематолога известного в определенных кругах. Продолжаем кушать и колоть всё то, что с отметкой «беременным нельзя». Кроме витамин для беременных. Это лишь часть назначений. Беременность я выносила. Тяжело далась. Всё время на сохранении, в кучей лекарств, уколов, вечной угрозы.Роды тоже очень тяжелые были.

 

Анти-ХГЧ и беременность.

 

Выносить можно. Но это постоянный контроль. Я сдавала хгч 2 раза в неделю. Смотрели именно рост показателя, не цифры. Без лекарств никак для меня. Самое главное, чтобы росло, а не конкретные цифры, хотя по границам тоже нужно вписываться. Анти-хгч сдавала до 16 недель раз в неделю, смотрел врач динамику от приема,корректировал дозу.

 

Наш квест завершился успешно. Я родила живого ребенка. Скажу честно. очень тяжело писать. Вспоминаю просто всё до, во время. Я до последнего хранила беременность в секрете. Так проще. Никто не сочувствует.

 

И да. Не верьте тому, что в интернете пишут. Идите к врачу.К хорошему. Просто так повторяющихся выкидышей не бывает. Иногда причина кроется в мелочах, которые можно подправить.

 

И да, сдавать либо на голодный желудок, либо через 4 часа после еды.

 

Стоит ли сдавать?

 

Девочки, милые мои, кто столкнулся с бесплодием, кто ЭКО делает безрезультатно, — сделайте анализ. Стоит реально не так дорого, как нервы и надежды. Да и лечится копеечными лекарствами. Увы, не всегда попадаются компетентные врачи. Даже если за прием берут дорого.

 

Знаете, о чем жалею? Что не знала раньше. Но об этом я стараюсь не думать. Да, анализ дорогой, но он стоит того. Это «стоит» сейчас носится с топотом по квартире.

 

Ещё момент. С такой проблемой следите во время беременности за состоянием плаценты. У меня в 21 неделю были огромные проблемы, раннее старение. Там из оперы доносить. При родах врачи удивлялись, что доносила, даже детское место было в удручающем состоянии. Бугры и ямы. Опять, при грамотном лечении можно дотянуть не в ущерб ребенку, но там лекарства должен подбирать хороший гематолог, который именно специализируется на ведении беременности. Лекарства серьезные, дозы индивидуально рассчитываются и постоянно корректируются.

 

Спасибо за внимание! Надеюсь, что отзыв окажется для вас полезным)))

О целессобразности анализа на антитела к ХГЧ

Путь российских пациентов всегда особенный. Мы ищем там, где не ступала нога человека, применяем препараты, которые дай Бог если начали пробовать на животных, сдаем анализы, о существовании которых не подозревают в остальном медицинском мире.

А уж если мы там найдем отклонения, говорим «эврика!» и бежим лечить, лечить, лечить. И иногда беременеем, иногда нет. Иногда получаем побочные эффекты от лечения, иногда нет.

Но главное — чувствуем, что нас лечат, нами занимаются. Таковы реалии.

Одним из таких анализов, вызывающих вопросы в плане своей целесообразности, являются антитела к ХГЧ.

Вроде, логично — такой нужный для беременности гормон, его даже иногда колят. И тут вдруг злые антитела не дают ему расти, это приводит к нашим неудачам…

Как мы помним, логичность предположения должна быть подтверждена в исследованиях.

Взяли 100 пациенток (хотя бы!), половина с антителами к ХГЧ, половина без. И сравнили эти группы по количеству потерь беременностей, по количеству неудач ЭКО.

Если разница оказалась достоверной, и в группе пациенток с антителами количество родов было меньше, в идеале должно быть проведено еще несколько исследований. Потом проведен метаанализ. И лишь затем сделаны выводы о влиянии антител на беременность. А потом мы будем разрабатывать методы лечения этой ситуации.

Вы спросите «на каком этапе находятся наши научные данные про эти антитела?»

Я честно искал, рылся в статьях и сайтах. На самом крупном сайте исследований по запросу мне попалась лишь одна статья подходящая по тематике. Но фамилии до боли знакомые, родные… Ба, да это Санкт-Петербург. О чем статья? Описание 3х случаев лечения антител к ХГЧ в программе ЭКО. Трех случаев… лечения… а где доказательства вообще, что их нужно лечить?… Проверил список литературы в статье, по идее, там должны быть приведены ключевые исследования по данной проблеме. Из 8 статей только еще одна посвещена антителам к ХГЧ. Рассказывает про одно наблюдение антител у пациентки с бесплодием. Статья от 2002 года.

Дальше больше. Решил подойти немного «читерски» и, зная, что иногда лаборатории, делая тест, ссылаются на исследования проведенные по поводу теста на своем сайте. Нашел лабораторию, нашел ссылки.

Или сайты заполняют люди далекие от медицины, или человек особо не парился, а может парился, но не нашел… Вы можете сами сделать выводы из названия этих четырех статей. Ни одной про антитела, все просто про ХГЧ.

Если мы предположим, что антитела к ХГЧ рассматриваются как нетипичные антитела при антифосфолипидном синдроме, поспешу разочаровать — довольно много читаю зарубежных статей по этой теме, но таких антител в списках ни разу не встречал.

Резюме: пока не доказано обратное (а пока не доказано!), сдавать антитела к ХГЧ, лечить их плазмаферезами, гормонами, иммуноглобулинами и прочими методами не нужно.

Ждем качественных исследований!

Здоровья и здравого смысла всем коллегам и пациентам!

Источники:

  1. Muller V, Ob’edkova K, Krikheli I, et al. Successful Pregnancy Outcome in Women with Recurrent IVF Failure and Anti-hCG Autoimmunity: A Report of Three Cases. Case Reports Immunol. 2016;2016:4391537. doi:10.1155/2016/4391537
  2. Fred Amato, Graham M. Warnes, Christine A. Kirby, Robert J. Norman, Infertility Caused by hCG Autoantibody, The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, Volume 87, Issue 3, 1 March 2002, Pages 993–997, https://doi. org/10.1210/jcem.87.3.8334

Автор: Куваев Вадим Сергеевич, к.м.н., гематолог. @dr.v.kuvaev

Похожее

Комментарии в Facebook

Анализ крови на антитела к ХГЧ (хорионический гонадотропин) Ig М, Ig G в Челябинске


Анализ крови на антитела к ХГЧ   (хорионический гонадотропин) Ig М, Ig G в Челябинске


Антитела к ХГЧ представляют собой показатель, подтверждающий возможность угрозы прерывания  беременности женщины. Основанием для проведения обследования является качественная подготовка женщины к беременности, профилактика невынашивания плода и преждевременных родов, а также выявление причин либо предпосылок к внутриутробной смерти плода. Анализ анти ХГЧ — наиболее эффективный способ подтверждения или опровержения бесплодия женщины.


Условия сдачи анализа


Анализ на антитела к ХГЧ сдается через 3-4 часа после последнего приема пищи


Показания для анализа антитела к ХГЧ

  • диагностика беременности на разных ее сроках.
  • диагностика на наличие или отсутствие внематочной беременности.
  • диагностика результативности осуществленного ранее искусственного аборта.
  • наблюдения характера течения процесса беременности.
  • диагностика развития либо прогрессирования опухолевых процессов.
  • диагностика пороков развития плода на начальных сроках беременности.


Интерпритация результатов


Норма:  отрицательный результат, отсутствие антител к ХГЧ


Патология: положительный результат, обнаружение антител к ХГЧ


Образование антител к ХГЧ происходит по следующим причинам:

  • при наличии дефекта в работе иммунной системы организма при инфекции вирусной инфекции или при генетических нарушениях
  • в случае проведения процедур стимуляции процесса овуляции у женщины, который предшествует проведению ЭКО


Появление в организме антител говорит о существовании высокой вероятности естественного выкидыша в случае беременности

Аутоантитела к гонадотропным гормонам и тестостерону у мужчин с бесплодием

ФГУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им.  академика В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России, Москва

Цель исследования. Изучение возможности продукции аутоантител к хорионическому гонадотропину человека (ХГЧ) и тестостерону у мужчин с бесплодием.
Материал и методы. Основную группу составили мужчины с бесплодием (n=71) и патозооспермией, контрольную — фертильные мужчины с нормозооспермией (n=32). В сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяли антитела к ХГЧ, тестостерону и подклассы IgG.
Результаты исследования. У мужчин с бесплодием наблюдали продукцию антител к ХГЧ и тестостерону IgM- и IgG-изотипов, четырех подклассов IgG с преобладанием функционально активных IgG1. Антитела к ХГЧ и тестостерону при бесплодии встречались чаще (у 40,8 и 25,4% соответственно), чем у фертильных мужчин (у 3,1%) (pКлючевые слова

аутоантитела

хорионический гонадотропин человека

тестостерон

мужское бесплодие

патозооспермия

1. Пономарева И.В., Сухих Г.Т., Никитин Э.Б. и др. Аутоантитела к хорионическому гонадотропину человека при привычном невынашивании беременности //Бюл. экспер. биол. ‒ 1996. ‒ № 4. ‒ C. 450‒452.
2. Сухих Г.Т., Божедомов В.А. Мужское бесплодие. ‒ М.: ЭКСМО-Пресс, 2009.
3. Цырлина Е.В., Порошина Т.Е. Хорионический гонадотропин как маркер трофобластической болезни// Практ. онкол. ‒ 2008. ‒ Т. 9, № 3. ‒ С. 150‒159.
4. Allen R.B., Li A., Landay M.F. et al. Hyperglycosylated human chorionic gonadotropin (HHCG): a novel finding in seminal plasma//Fertil. and Steril. ‒ 2008. ‒ Vol. 90 (suppl.1). ‒ P. S97.
5. Berger P., Gruschwitz M., Spoettl G. et al. Human chorionic gonadotropin (hCG) in the male reproductive tract// Mol. Cell. Endocrinol. ‒ 2007. ‒ Vol. 260‒262. ‒ P. 190‒196.
6. Dirnhofer S., Wick G., Berger P. The suitability of human chorionic gonadotropin (hCG)-based birth-control vaccines//Immunol. Today. ‒ 1994. ‒ Vol. 15, № 10. ‒ P. 469‒474.
7. Moundgal N.R., Jeyakumar M., Krishnamurthy H.N. et al. Development of male contraceptive vaccine- a perspective// Hum. Reprod. Update. ‒ 1997. ‒ Vol. 3, № 4. ‒ P. 335‒346.
8. Ogura T., Mimura Y., Otsuka F. et al. Hypothyroidism associated with anti-human chorionic gonadotropin antibodies secondarily produced by gonadotropin therapy in a case of idiopathic hypothalamic hypogonadism// J. Endocrinol. Invest. ‒ 2003. ‒ Vol. 26, № 11. ‒ P. 1128‒1135.
9. Yao B., Wang J., Liang W. et al. Follicle-stimulating hormone autoantibody is involved in idiopathic spermatogenic dysfunction // Asian J. Androl. ‒ 2008. ‒ Vol. 10, № 6. ‒ P. 915‒921.

Менжинская Ирина Владимировна, канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаборатории клинической иммунологии ФГУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4
Телефон: (8-495)438-11-83
E-mail: [email protected]

%PDF-1.7
%
2 0 obj
>
endobj
4 0 obj
>
stream

  • Менжинская Ирина Владимировна
  • application/pdf2019-06-20T16:30:47+03:00Microsoft® Word 20132019-06-20T23:22:12+03:00Microsoft® Word 2013uuid:9c464bfd-03a4-4298-8c8c-83ec18ab6205uuid:23ea171f-bf25-4064-8f6f-d944b8d3c69a

    endstream
    endobj
    3 0 obj
    >
    stream
    xoy੏9Cv]UqGd,#m Ef»x٭zxDQqzHΛ&L. {\RuK⚏cqD>V}’҇I|-;>՘%ωQB5:j$ _D+̾F}Ҋ1;NŨٷux
    !UR㦍\I4=愴!8amda’/ѫW6
    KFɉ*U\%&mT\TJpQrQcpTĭ)>GS}*gN*!UM0ra)rIzIKr]RKrIk%UnǜT]RVI7oIu9h#2i)g%E6r

    Свободная b-субъединица хорионического гонадотропина человека (свободный b-ХГЧ, free b-HCG)

    Интерпретация результатов

    Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

    Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО: нг/мл.

    Референсные значения:

    • здоровые мужчины менее 2,0 нг/мл;


    • небеременные женщины (в т. ч. и после менопаузы) менее 2,0 нг/мл.

    Беременные женщины, 1-й триместр:

    Неделя

    беременности

    Содержание своб. b-ХГЧ,

    нг/мл

    Медиана,

    нг/мл

    8 23.7 — 162,5

    9

    23,6 — 193,1

    70,90

    10

    25,8 — 181,6

    58,17

    11

    17,4 — 130,4

    47,73

    12

    13,4 — 128,5

    39,17

    13

    14,2 — 114,7

    32,14

    Беременные женщины, 2-й триместр:

    Неделя

    беременности

    Содержание своб. b-ХГЧ,

    нг/мл

    Медиана,

    нг/мл

    14

    8,9 — 79,4

    23,56

    15

    5,87 — 62,0

    18,36

    16

    4,67 — 50,0

    14,30

    17

    3,33 — 42,8

    11,14

    18

    3,84 — 33,3

    8,88

    19




    6,76

    20




    5,27

    21




    4,11

    22




    3,20

    Повышение значений:

    1. мужчины: тестикулярные опухоли;

    2. женщины: хориокарцинома, пузырный занос;

    3. беременные женщины: увеличенный риск наличия у плода трисомии 21 (синдром Дауна) повышение в среднем в 2 раза. Редко: ложноположительные результаты (наличие в крови пациента гетерофильных антител — например, при применении препаратов с использованием компонентов сыворотки животных).

    Снижение значений: беременные женщины: риск наличия у плода трисомии 18 (синдром Эдвардса).

    Внимание! Изменён нижний предел обнаружения в наборах для определения свободного бета-ХГЧ (тест №189) — от 0,1 нг/мл до 2,0 нг/мл. Применимость теста для выявления и мониторинга трофобластных и тестикулярных опухолей ограничена (требуемая чувствительность 0,1 нг/мл). Результаты теста следует интерпретировать с осторожностью, они не могут рассматриваться как абсолютное свидетельство наличия или отсутствия заболевания.

    Бесплодие, вызванное аутоантителами ХГЧ | Журнал клинической эндокринологии и метаболизма

    Аутоантитела против ХГЧ были обнаружены у пациента с 9-летним анамнезом вторичного бесплодия. Хотя у пациентки были регулярные менструальные циклы, она зачала спонтанно и имела хорошие гормональные и фолликулярные реакции на режимы гонадотропной стимуляции во время исследования оплодотворения in vitro , у нее наблюдалась очевидная повторяющаяся потеря беременности, связанная с длительным повышением уровня ХГЧ. Первоначально присутствие комплекса ХГЧ с высокой молекулярной массой было продемонстрировано в сыворотке с помощью гель-хроматографии. Связывание рекомбинантного hCG [ 125 I] с образцом сыворотки и впоследствии с очищенным аффинно IgG из того же образца выявило присутствие антитела к hCG. Было показано, что антисыворотка является специфической с низким сродством (K a , 1,4 × 10 6 л / моль), но высокой емкостью (418 нмоль / л) к ХГЧ. Перекрестная реакция с рекомбинантным человеческим ФСГ, рекомбинантным человеческим ЛГ, ХГЧα и ХГЧβ была низкой (<0.019%, 0,021%, 0,039% и 0,006% соответственно). Кроме того, в биотесте in vitro было показано, что инактивированная нагреванием сыворотка и очищенный сродством IgG ингибируют действие ХГЧ. Мы предполагаем, что сохраняющийся титр антител ответственен за бесплодие пациента.

    ХГЧ продуцируется в основном клетками синцитиотрофобластов периимплантационного эмбриона и, в меньшей степени, гипофизом, и представляет собой гетеродимер, состоящий из нековалентно связанной α-субъединицы (hCGα) и β-субъединицы (hCGβ). Он структурно связан с гормонами гипофиза ФСГ, ЛГ и ТТГ с общей α-субъединицей и специфической β-субъединицей. Считается, что ХГЧ играет важную роль в установлении и поддержании беременности на ранних сроках.

    Антитела ХГЧ были обнаружены при ряде обстоятельств. 1) Было показано, что вакцинация против ХГЧ блокирует фертильность у мартышек, бабуинов и макак-резусов (1). Кроме того, клинические испытания продемонстрировали, что иммунизация женщин либо ХГЧβ, гетероспецифическим димером ХГЧ, связанным с α-субъединицей ЛГ овцы, либо С-концевой областью ХГЧβ, приводила к развитию контрацептивных уровней антител к ХГЧ. (2–4).Исследование Talwar et al. (3) также предоставил доказательства того, что циркулирующие антитела к ХГЧ предотвращали беременность в 1224 циклах и что для поддержания титров антител требовались бустерные инъекции. Фертильность восстанавливалась, когда титры (нейтрализующая способность антитела) падали ниже 35 нг ХГЧ / мл сыворотки. 2) антитела к ХГЧ были обнаружены у молодых мужчин, получавших экзогенный ХГЧ в моче (5, 6). 3) О наличии естественных антител к ХГЧ / ЛГ также сообщалось у молодых женщин.Wass et al. (7) описал присутствие антител к ХГЧ / ЛГ в нормальной сыворотке, но это сродство было слишком низким, чтобы влиять на биологическую активность. Впоследствии сообщалось, что у женщины в анамнезе был самопроизвольный аборт с последующим ановулярным периодом, а затем нормальными овуляторными циклами и вариациями титров ХГЧ / ЛГ в ее сыворотке (8). Пациент ранее не подвергался гормональной терапии.

    Мы описываем случай 30-летней женщины с необъяснимым бесплодием, у которой развились нейтрализующие антитела к ХГЧ, которые, по-видимому, поддерживались многократным воздействием экзогенного и эндогенного ХГЧ.Это мешало лечению оплодотворением in vitro (ЭКО), блокируя действие экзогенного ХГЧ.

    Отчет о болезни

    Пациентка в возрасте 16 лет имела самопроизвольную беременность, протекающую без осложнений, с нормальными естественными родами. После 3-летнего периода контрацепции пациентка несколько лет пыталась забеременеть. При обследовании бесплодия у нее была выявлена ​​овуляция, нормальная проходимость матки и маточных труб, а анализ спермы у ее партнера был удовлетворительным.Пациентка прошла три цикла стимулированного ЭКО с использованием агониста ГнРГ, менопаузального гонадотропина человека и ХГЧ (10 000 МЕ). В каждом случае большое количество фолликулов развивалось с соответствующими концентрациями E2 в сыворотке. Ооциты никогда не получали, а аспираты состояли только из прозрачной жидкости со здоровыми скоплениями гранулезных клеток. Пациентам посоветовали рассмотреть возможность использования донорских ооцитов. Это было неприемлемо, и они связались с отделением репродуктивной медицины Университета Аделаиды.

    После циклов ЭКО были задокументированы свидетельства по крайней мере семи случаев, когда тест на ХГЧ на беременность был положительным. Плод не был замечен ни на одном этапе, и считалось, что у пациентки были повторные выкидыши. Тем не менее, уровень ХГЧ сохранялся в течение нескольких месяцев после выкидыша. Дальнейшие анализы выявили низкий титр антикардиолипинового IgM, нормальный уровень активированного протеина C и пограничный уровень 64% для протеина S. Электрофоретический рисунок общего протеина оказался нормальным при визуальной оценке, и только уровень IgM оказался повышенным. (3.61 г / литр; нормальный диапазон 0,5–3,0 г / л). Пациентка наблюдалась в течение одного менструального цикла, и было показано, что овуляция наступила на 19-й день цикла с отличным прогестероновым ответом, но повышенным уровнем ЛГ (21–26 МЕ / литр). На следующем цикле был замечен один большой фолликул, и пациенту был введен ХГЧ (10 000 МЕ). Через 14 дней тест на беременность был положительным, но в течение нескольких недель уровень ХГЧ медленно снижался. Впоследствии пациентка прошла несколько циклов внутриматочного осеменения с легкой стимуляцией яичников рекомбинантным ФСГ (Puregon, 50 МЕ; N.В. Органон, Осс, Нидерланды). В каждом случае вводили ХГЧ (5000 МЕ) и получали положительный тест на беременность, но со снижением уровня ХГЧ в течение нескольких недель. Во всех случаях у пациентки был менструальный цикл в ожидаемое время. В последующих циклах внутриматочного осеменения ХГЧ не применялся, и произошла спонтанная овуляция. Тесты на беременность всегда были отрицательными. На этом этапе пациент был исследован на антитела к ХГЧ.

    Материалы и методы

    Реактивы

    Трансформированная линия клеток Лейдига, MA10, была предоставлена ​​доктором.М. Асколи (Университет Айовы, Эймс, Айова). Рекомбинантный человеческий CG (r-hCG; Ovidrel) и рекомбинантный человеческий LH (r-hLH, Luveris) были пожертвованы Serono Australia Pty. Ltd. (Frenchs Forrest, Австралия). Рекомбинантный человеческий ФСГ (r-hFSH, Gonal-F) был приобретен у Serono Australia Pty. Ltd. hCGβ, первый международный эталонный препарат 75/551, был получен из Национального института биологических стандартов (Лондон, Великобритания). Свободные α- и β-субъединицы ХГЧ были предоставлены Национальной программой по гормонам и гипофизу NIDDK, NIH, Школа медицины Университета Мэриленда (Балтимор, Мэриленд). [ 125 I] r-ХГЧ был получен методом хлорамина-Т с результирующей удельной активностью 121–150 кБк / пмоль.

    Иммуноферментный анализ на ХГЧ

    ХГЧ измеряли в сыворотке или плазме с помощью иммунометрического анализа общего ХГЧβ с использованием набора реагентов Vitros Total β-hCG (Ortho-Clinical Diagnostics, Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK) в автоматизированной иммунодиагностической системе Vitros. По данным производителя, перекрестная реактивность ТТГ (250 мМЕ / литр), ЛГ (400 МЕ / литр) и ФСГ (400 МЕ / литр) составляла менее 5%, менее 5% и менее 10%, соответственно.ХГЧ в моче измеряли с помощью того же анализа после того, как образец концентрировали в 30 раз с помощью ультрафильтрации (мембрана Omega, отсекающая молекулярную массу 3 кДа, лаборатория Pall Gelman, Сидней, Австралия). Результаты были подтверждены анализом общего β-ХГЧ Abbott ARCHITECT (Abbott Laboratories, Чикаго, Иллинойс).

    Очистка IgG

    Сыворотка (3 мл) с уровнями ХГЧ менее 5 МЕ / литр была загружена в колонку с белком G (1 мл; HiTrap, Amersham Pharmacia Biotech, Упсала, Швеция), предварительно уравновешена и обработана 20 мМ фосфатом натрия, pH 7. .0 при скорости потока 0,5 мл / мин. Колонку промывали тем же буфером (5 мл), а затем IgG элюировали 100 мМ глицин-HCl, pH 2,7. Фракции с IgG объединяли, концентрировали и обессоливали с использованием центробежного концентратора Macrosep с мембраной, отсекающей молекулярную массу 10 кДа (Pall Filtron, Northborough, MA). IgG определяли количественно с помощью Micro BCA Protein Assay (Pierce Chemical Co., Rockford, IL), используя BSA в качестве стандарта.

    Гель-фильтрация

    Сыворотка (1 мл) с эндогенным ХГЧ подвергалась гель-фильтрации на колонке Superdex 75 (1.6 × 60 см; Amersham Pharmacia Biotech), предварительно уравновешивают и прогоняют с бикарбонатом аммония 150 мМ при скорости потока 1 мл / мин. Фракции объемом 1 миллилитр собирали, обессоливали, лиофилизировали и восстанавливали в 250 мкл 50 мМ фосфатного буфера, pH 7,4, с 150 мМ NaCl и 0,5% BSA. Фракции анализировали на иммунореактивность ХГЧ. Сыворотку (200 мкл) или IgG (200 мкл; 8,5 мг), инкубированные с 12 мкл [ 125 I] r-hCG (700000 имп / мин) в течение 18 ч при 4 ° C, подвергали гель-фильтрации на колонке Superose 12 ( 1 × 30 см; Amersham Pharmacia Biotech), предварительно уравновешивают и запускают с тем же буфером, как описано выше, при скорости потока 0. 5 мл / мин. Затем фракции оценивали на активность [ 125 I] r-ХГЧ.

    Электрофорез и вестерн-блоттинг

    Белки сыворотки и IgG, очищенные из той же сыворотки, разделяли прерывистым SDS-PAGE в 6% гелях в невосстанавливающих условиях по методу Лэммли (9). Затем белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану (0,4 мкм; Bio-Rad Laboratories, Inc., Regent Park, Australia), используя процедуру, описанную Towbin et al. (10). Мол. Вес. Определяли путем сравнения с предварительно окрашенными белками Precision Standard (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Полосы IgG были идентифицированы путем инкубации мембраны (предварительно заблокированной 5% BSA) с античеловеческим IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена (1:20 000; Amersham Pharmacia Biotech), в течение 1 ч при комнатной температуре, обработанной реагентами повышенной хемилюминесценции (ECL) (Amersham Pharmacia Biotech) и подвергали воздействию Hyperfilm ECL (Amersham Pharmacia Biotech). Способность разделенных белков связывать [ 125 I] r-hCG оценивали путем инкубации нитроцеллюлозной мембраны с [ 125 I] r-hCG (80 000 имп / мин / мл) в PBS-BSA в течение 18 часов при 4 ° C. с последующей обработкой Hyperfilm MP (Amersham Pharmacia Biotech) в течение 72 часов при -80 ° C.

    Биологический анализ

    Способность сыворотки или IgG пациента нейтрализовать биоактивность ХГЧ определяли с помощью биоанализа in vitro с использованием трансформированной линии мышиных клеток Лейдига MA10 (11), как ранее описано Simula et al. (12). Вкратце, стандарты (r-hCG; 100 мкл) или r-hCG, предварительно обработанные различными количествами сыворотки или IgG, инкубировали со 100 мкл клеточной суспензии (0,5 × 10 5 клеток / лунку) в планшете для микротитрования (Costar, Кембридж, Массачусетс) в течение 2 ч при 37 ° C в 5% CO 2 /95% воздуха.Прогестерон, продуцируемый и секретируемый в среду, измеряли с использованием набора RIA от Diagnostics Systems Laboratories, Inc. (Webster, TX). Биоактивность всех образцов оценивалась в рамках одного анализа, чтобы избежать любых вариаций между анализами.

    Характеристики антисыворотки

    Титр антитела оценивали путем инкубации разведений сыворотки (50 мкл) в течение 18 часов при 4 ° C с [ 125 I] r-hCG (30 000 имп / мин; SA, 121 кБк / пмоль) и 0,015 м фосфата, pH 7. .4, с 0,15 м NaCl, 0,05% BSA и 0,05% азида натрия в общем объеме анализа 200 мкл. Связанный с IgG [ 125 I] r-hCG осаждали 25% полиэтиленгликолем 6000 в PBS (500 мкл) и разделяли центрифугированием с последующей аспирацией супернатанта. Количество антисыворотки, связывающей 50% [ 125 I] r-ХГЧ, использовали в RIA для определения специфичности и аффинности антисыворотки. Специфичность антисыворотки оценивали путем сравнения вытеснения [ 125 I] r-hCG увеличением доз r-hCG, свободного hCGα, свободного hCGβ, r-hFSH и r-hLH.Данные кривой доза-ответ r-hCG использовали для определения связывающей способности и аффинности антисыворотки с помощью анализа Скэтчарда (13).

    Результаты

    Было показано, что в сыворотке присутствует

    hCG, о чем судили по обнаружению в двух различных анализах общего hCGβ (Vitros и Abbott ARCHITECT) и параллелизму разведений стандарта и образца в анализе. Хотя ХГЧ был обнаружен в сыворотке крови, его не было обнаружено в 24-часовом образце мочи, собранном в то же время.

    Профиль элюции Superdex 75 иммунореактивности сыворотки крови пациентки сравнивали с профилем нормальной беременной женщины с эквивалентным уровнем ХГЧ. Результаты, представленные на рис. 1, демонстрируют, что пик иммунореактивности ХГЧ из сыворотки пациента элюируется во фракциях 41-51 с кажущейся молекулярной массой более 70 кДа (вне диапазона разделения колонки) и больше, чем иммунореактивность ХГЧ контрольный субъект, который элюировал во фракциях 52–65 (кажущаяся молекулярная масса 67 кДа).Чтобы изучить возможность связывания ХГЧ с белком сыворотки, сыворотки, собранные как у пациента, так и у контрольного субъекта, инкубировали с [ 125 I] r-ХГЧ в течение 18 часов при 4 ° C и хроматографировали на колонке Superose 12. Результаты на фиг. 2А показывают, что радиоактивный пик [ 125 I] r-ХГЧ элюируется раньше (пик активности во фракции 23) при инкубации с сывороткой пациента по сравнению с при инкубации с контрольной сывороткой (пик активности во фракциях). 28–29). Сходные результаты были получены при одинаковой обработке IgG, очищенного из одной и той же сыворотки (рис.2B), что свидетельствует о наличии антитела против ХГЧ. Это также подтверждается результатами SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Разрешение сывороточных белков и соответствующих им очищенных с помощью аффинности IgG показано на фиг. 3A. Иммунодетекция полос IgG в сыворотке и очищенном IgG после SDS-PAGE и переноса на нитроцеллюлозную мембрану показала, что они имеют молекулярные массы в диапазоне 112–190 кДа (рис. 3B). Было показано, что полосы с молекулярными массами от 112 до 138 кДа, соответствующие части полос IgG в сыворотке и очищенному IgG пациента, связывают [ 125 I] r-hCG (рис.3C, дорожки 1 и 3 соответственно). Для сравнения, ни контрольная сыворотка (фиг. 3C, дорожка 2), ни контрольный IgG (фиг. 3C, дорожка 4) не связались с [ 125 I] r-hCG.

    Рисунок 1.

    Профили элюирования иммунореактивности ХГЧ, когда сыворотки подвергали гель-хроматографии на колонке Superdex 75 (16/60), предварительно уравновешивали и прогоняли с бикарбонатом аммония 150 мм.

    Рисунок 1.

    Профили элюирования иммунореактивности ХГЧ, когда сыворотки подвергали гель-хроматографии на колонке Superdex 75 (16/60), предварительно уравновешивали и прогоняли с бикарбонатом аммония 150 мМ.

    Рисунок 2.

    Профили элюции [ 125 I] r-hCG, который инкубировали либо с сывороткой (A), либо с IgG (B), очищали из тех же сывороток и подвергали гель-хроматографии на колонке Superose 12. , предварительно уравновешивают и запускают с бикарбонатом аммония 150 мМ. Стрелка указывает положение элюирования [ 125 I] r-hCG.

    Рис. 2.

    Профили элюции [ 125 I] r-hCG, который инкубировали либо с сывороткой (A), либо с IgG (B), очищенными из тех же сывороток и подвергали гель-хроматографии на Superose 12. колонку, предварительно уравновешенную и работающую с бикарбонатом аммония 150 мм.Стрелка указывает положение элюирования [ 125 I] r-hCG.

    Рисунок 3.

    A, Двенадцатипроцентный SDS-PAGE сыворотки пациента (дорожка 1), контрольной сыворотки (дорожка 2), IgG пациента (дорожка 3) и контрольного IgG (дорожка 4) в условиях невосстановления, за которыми следует Кумасси синий окрашивание. B, Вестерн-блоттинг тех же образцов, что и в A, с последующим иммуноокрашиванием с использованием античеловеческих IgG и детектирования ECL путем воздействия Hyperfilm ECL. C — Вестерн-блоттинг тех же образцов с последующей инкубацией с [ 125 I] r-hCG и воздействием Hyperfilm MP.

    Рисунок 3.

    A, Двенадцатипроцентный SDS-PAGE сыворотки пациента (дорожка 1), контрольной сыворотки (дорожка 2), IgG пациента (дорожка 3) и контрольного IgG (дорожка 4) в условиях невосстановления, за которыми следует Кумасси. синее окрашивание. B, Вестерн-блоттинг тех же образцов, что и в A, с последующим иммуноокрашиванием с использованием античеловеческих IgG и детектирования ECL путем воздействия Hyperfilm ECL. C — Вестерн-блоттинг тех же образцов с последующей инкубацией с [ 125 I] r-hCG и воздействием Hyperfilm MP.

    ХГЧ-индуцированная стимуляция выработки прогестерона клетками MA10 in vitro , как было показано, ингибируется добавлением возрастающих доз любой инактивированной нагреванием сыворотки (рис.4A) или IgG, очищенный из сыворотки крови пациента (рис. 4B). Инактивированная нагреванием сыворотка и IgG добавляли к r-hCG (конечная концентрация 20 680 МЕ / литр) перед добавлением к клеткам MA10. Полное ингибирование было достигнуто с менее чем 12,5 мкл сыворотки или 880 мкг / мл (176 мкг / лунка) общего IgG. Однако инактивированная нагреванием сыворотка и IgG от контрольного субъекта не оказывали ингибирующего действия.

    Рисунок 4.

    Влияние инактивированной нагреванием сыворотки (A) и IgG (B) на индуцированную ХГЧ стимуляцию выработки прогестерона трансформированной линией мышиных клеток Лейдига MA10.

    Фигура 4.

    Влияние инактивированной нагреванием сыворотки (A) и IgG (B) на индуцированную ХГЧ стимуляцию выработки прогестерона трансформированной линией мышиных клеток Лейдига MA10.

    Специфичность антисыворотки была продемонстрирована путем инкубации сыворотки, разведенной 1:12, с постоянным количеством [ 125 I] r-hCG и увеличивающимися количествами r-hCG, r-hFSH, r-hLH, hCGα. , и ХГЧβ. Перекрестная реактивность r-hFSH, r-hLH, hCGα и hCGβ была менее 0,019%, 0,021%, 0,039% и 0.006% на молярной основе, соответственно. Данные кривой связывания доза-ответ r-hCG, построенные по методу Скэтчарда (рис. 5), показали наличие антисыворотки с низким сродством к r-hCG (K a , 1,4 × 10 6 литр / моль), но высокая связывающая способность 418 нмоль / л.

    Рис. 5.

    График Скэтчарда данных конкурентного связывания r-hCG с использованием 50 мкл сыворотки пациента (разведенной 1:12) со 100 мкл [ 125 I] r-hCG (0.00656 пмоль; SA, 150 кБк / пмоль) в присутствии возрастающих количеств немеченого r-hCG (0,013–26,3 пмоль) и с поправкой на неспецифическое связывание. Общее количество сайтов связывания составляет 418 нмоль / литр неразбавленной сыворотки, а константа аффинности (K a ) составляет 1,4 × 10 6 литров / моль.

    Рисунок 5.

    График Скэтчарда данных конкурентного связывания r-hCG с использованием 50 мкл сыворотки пациента (разведенной 1:12) со 100 мкл [ 125 I] r-hCG (0,00656 пмоль; SA, 150 кБк / пмоль), в присутствии возрастающих количеств немеченого r-hCG (0.013–26,3 пмоль) с поправкой на неспецифическое связывание. Общее количество сайтов связывания составляет 418 нмоль / литр неразбавленной сыворотки, а константа аффинности (K a ) составляет 1,4 × 10 6 литров / моль.

    Обсуждение

    Противоречивые отчеты описывают присутствие (7) и отсутствие (14) антител ХГЧ в нормальной сыворотке человека. Исследование Johnson et al. (14) также продемонстрировал отсутствие таких антител в сыворотке крови группы бесплодных женщин.Хотя несколько исследователей предположили, что аутоиммунитет к гонадотропинам может быть причиной гонадной недостаточности (15), нам известен только один случай, описывающий наличие аутоантител к ХГЧ / ЛГ, которые, как предполагалось, были причиной бесплодия у 32- летняя женщина (8). В этом случае пациентка ранее не подвергалась гормональной терапии и после самопроизвольного аборта имела антитела с высоким сродством к ХГЧ (K a ,> 2 × 10 10 л / моль) и ЛГ (K a ,> 0.5 × 10 10 л / моль), а также высокая связывающая способность ХГЧ (максимальная, 2000 нг [ 125 I] связанного ХГЧ / мл сыворотки). Когда овуляторные циклы возобновились, связывающая способность для [ 125 I] ХГЧ снизилась до 1 нг / мл сыворотки, а сродство к ЛГ снизилось. Мы обнаружили наличие антитела ХГЧ в сыворотке крови пациента с 9-летним необъяснимым вторичным бесплодием. Титр оставался стабильным в течение периода наблюдения (6 месяцев) после последнего обнаруженного ХГЧ (результаты не показаны).В отличие от предыдущего случая, антисыворотка имела более низкое сродство (K a , 1,4 × 10 6 л / моль), но более высокую связывающую способность (418 нмоль / л сыворотки; 348 333 МЕ / л). Этой связывающей способности было достаточно, чтобы нейтрализовать предполагаемый уровень эндогенного ХГЧ 135 МЕ / л во время периимплантации (4) и даже максимальные уровни ХГЧ в сыворотке 187 МЕ / л, зарегистрированные после подкожной инъекции экзогенного ХГЧ (5000 МЕ), как правило используется для индукции овуляции (16). Невозможность восстановить какие-либо ооциты из нескольких фолликулов в трех циклах ЭКО свидетельствовала о незрелом комплексе кумулюс-ооцит, вероятно, из-за блокирования введенного экзогенного ХГЧ антителом.Способность сыворотки пациента нейтрализовать биологическую активность ( in vitro ) ХГЧ на уровнях, превышающих уровни, обнаруженные во время периимплантации, является дополнительным доказательством того, что антитело ХГЧ было основной причиной самопроизвольных абортов у пациента. Тот факт, что антитело было специфичным для интактной гетеродимерной молекулы ХГЧ с низкой перекрестной реакцией с α- и β-субъединицами, предполагает, что антитело должно связываться с сайтом, охватывающим обе субъединицы, что важно для распознавания рецептора.Отсутствие детектируемого ХГЧ в моче пациента предоставило дополнительное доказательство того, что иммунореактивный сывороточный ХГЧ был связан с антителом. Образование такого комплекса с высокой молекулярной массой предотвратит фильтрацию через почки, которые являются основным органом, ответственным за деградацию и / или выведение ХГЧ (17), и объяснит его сохранение в сыворотке. Низкая перекрестная реакция с ЛГ или ФСГ позволила пациенту иметь нормальный овулярный цикл и вызвать беременность.

    Клинические испытания вакцинации против ХГЧ показали, что уровни противозачаточных антител ХГЧ снижаются в отсутствие бустерных инъекций, что указывает на обратимость процесса (1, 2).Хотя источник антигена в нашем исследовании неизвестен, длительный период бесплодия предполагает, что ХГЧ, вводимый во время различных курсов лечения, и / или ХГЧ, продуцируемый спонтанной беременностью, были иммуногенными усилителями, которые поддерживали титр антител. С другой стороны, эндогенный ХГЧ пациента может стать иммуногенным в результате структурных изменений, возможно, вызванных мутацией в одном из генов ХГЧ. Однако мы не секвенировали кластеры генов CGβ. Таким образом, был сделан вывод, что высокая связывающая способность антитела против ХГЧ была основной причиной бесплодия пациентки, и единственным возможным вариантом для пациентки было гестационное суррогатное материнство.

    Благодарности

    Мы благодарим г-жу Мишель Коло и г-на Томаса А. Гилмора за их техническую поддержку.

    Сокращения:

    • ECL,

      Усиленная хемилюминесценция;

    • hLH,

    • IVF,

    • r-hCG,

    1

    Hearn

    JP

    1978

    Иммунологическое вмешательство в распознавание беременностью у приматов.

    Ciba Found Symp

    64

    :

    353

    375

    2

    Singh

    O

    ,

    Rao

    LV

    ,

    Gaur

    A

    ,

    Sharma

    NC Alam A,

    NC

    ,

    Talwar

    GP

    1989

    Ответ антител и характеристики антител у женщин, иммунизированных тремя противозачаточными вакцинами, индуцирующими антитела против хорионического гонадотропина человека.

    Fertil Steril

    52

    :

    739

    744

    3

    Talwar

    GP

    ,

    Singh

    O

    ,

    Pal

    R

    ,

    Chatterjee

    N

    ,

    Chatterjee

    N

    ,

    P

    ,

    Dhall

    K

    ,

    Kaur

    J

    ,

    Das

    SK

    ,

    Suri

    S

    ,

    Buchshee

    K

    ,

    Saraya

    L

    Na

    2

    72 S

    1994

    Вакцина, предотвращающая беременность у женщин.

    Proc Natl Acad Sci USA

    91

    :

    8532

    8536

    4

    Джонс

    WR

    ,

    Брэдли

    J

    ,

    Джадд

    SJ

    H,

    Денхолм

    Денхолм

    Ing

    RMY

    ,

    Mueller

    UW

    ,

    Powell

    J

    ,

    Griffin

    PD

    ,

    Stevens

    VC

    1988

    Фаза 1 клинических испытаний контрольной вакцины Всемирной организации здравоохранения

    .

    Ланцет

    1295

    1298

    5

    Клаустрат

    B

    ,

    Дэвид

    L

    ,

    Faure

    A

    ,

    Франсуа

    R

    1983

    Развитие антигуманного мышления антитела к гонадотропинам у пациентов с гипогонадотропным гипогонадизмом. Исследование четырех пациентов.

    J Clin Endocrinol Metab

    57

    :

    1041

    1047

    6

    Сокол

    RZ

    ,

    McClure

    RD

    ,

    Peterson

    M

    000,

    9172 9172

    RS

    Swerdloff

    Неудача терапии гонадотропинами, вторичная по отношению к антителам, индуцированным хорионическим гонадотропином.

    J Clin Endocrinol Metab

    52

    :

    929

    933

    7

    Wass

    M

    ,

    McCann

    K

    ,

    Baghawe

    KD

    1978

    Изоляция антител HCG

    / ЛГ из сывороток человека.

    Nature

    274

    :

    368

    370

    8

    Pala

    A

    ,

    Coghi

    I

    ,

    Spampinato

    G

    ,

    Di Gregorio

    Strom

    R

    R

    ,

    Carenza

    L

    1988

    Иммунохимические и биологические характеристики человеческого аутоантитела к хорионическому гонадотропину и лютеинизирующему гормону человека.

    J Clin Endocrinol Metab

    67

    :

    1317

    1321

    9

    Laemmli

    UK

    1970

    Расщепление структурных белков во время сборки головки бактериофага Т4.

    Nature

    227

    :

    680

    685

    10

    Towbin

    H

    ,

    Staehelin

    T

    ,

    Gordon

    J

    1979

    Электрофоретический перенос полифоретических белков листы нитроцеллюлозы: порядок действий и некоторые применения.

    Proc Natl Acad Sci USA

    76

    :

    4350

    4357

    11

    Ascoli

    M

    1981

    Характеристика нескольких клональных линий культивируемых опухолевых клеток Лейдига: гонадотропиновые рецепторы и стероидогенные реакции.

    Эндокринология

    108

    :

    88

    95

    12

    Simula

    AP

    ,

    Amato

    F

    ,

    Faast

    R

    ,

    Lopata

    A

    ,

    Berka

    ,

    Norman

    RJ

    1995

    Биоактивность лютеинизирующего гормона / хорионического гонадотропина у обыкновенной мартышки ( Callithrix jacchus ) обусловлена ​​хорионической молекулой гонадотропина человека со структурой, промежуточной между человеческим хорионизирующим гормоном и хорионизирующим гормоном.

    Biol Reprod

    53

    :

    380

    389

    13

    Скэтчард

    G

    1949

    Притяжение белков для малых молекул и ионов.

    Ann NY Acad Sci

    51

    :

    660

    672

    14

    Johnson

    PM

    ,

    Cheng

    HM

    ,

    Stevens

    VC

    ,

    Matangkasombut

    Matangkasombut

    Реактивность антител против трофобластов и продуктов трофобластов.

    J Reprod Immunol

    8

    :

    347

    352

    15

    Gleicher

    N

    1998

    Аутоантитела при бесплодии: актуальное мнение.

    Обновление Hum Reprod

    4

    :

    169

    176

    16

    Saal

    W

    ,

    Glowania

    HJ

    ,

    Hengst

    W

    ,

    Happ

    J

    1991

    Фармакодинамика и фармакокинетика после подкожного и внутримышечного введения хорионического гонадотропина человека.

    Fertil Steril

    56

    :

    225

    229

    17

    Nisula

    BC

    ,

    Blithe

    DL

    ,

    Akar

    A

    ,

    Lefort

    G

    ,

    Wehmann RE

    1989

    Метаболическая судьба хориогонадотропина человека.

    J Steroid Biochem

    33

    :

    733

    737

    Авторские права © 2002 Эндокринное общество

    Бесплодие, вызванное аутоантителами ХГЧ | Журнал клинической эндокринологии и метаболизма

    Аутоантитела против ХГЧ были обнаружены у пациента с 9-летним анамнезом вторичного бесплодия. Хотя у пациентки были регулярные менструальные циклы, она зачала спонтанно и имела хорошие гормональные и фолликулярные реакции на режимы гонадотропной стимуляции во время исследования оплодотворения in vitro , у нее наблюдалась очевидная повторяющаяся потеря беременности, связанная с длительным повышением уровня ХГЧ. Первоначально присутствие комплекса ХГЧ с высокой молекулярной массой было продемонстрировано в сыворотке с помощью гель-хроматографии. Связывание рекомбинантного hCG [ 125 I] с образцом сыворотки и впоследствии с очищенным аффинно IgG из того же образца выявило присутствие антитела к hCG.Было показано, что антисыворотка является специфической с низким сродством (K a , 1,4 × 10 6 л / моль), но высокой емкостью (418 нмоль / л) к ХГЧ. Перекрестная реакция с рекомбинантным человеческим ФСГ, рекомбинантным человеческим ЛГ, hCGα и hCGβ была низкой (<0,019%, 0,021%, 0,039% и 0,006% соответственно). Кроме того, в биотесте in vitro было показано, что инактивированная нагреванием сыворотка и очищенный сродством IgG ингибируют действие ХГЧ. Мы предполагаем, что сохраняющийся титр антител ответственен за бесплодие пациента.

    ХГЧ продуцируется в основном клетками синцитиотрофобластов периимплантационного эмбриона и, в меньшей степени, гипофизом, и представляет собой гетеродимер, состоящий из нековалентно связанной α-субъединицы (hCGα) и β-субъединицы (hCGβ). Он структурно связан с гормонами гипофиза ФСГ, ЛГ и ТТГ с общей α-субъединицей и специфической β-субъединицей. Считается, что ХГЧ играет важную роль в установлении и поддержании беременности на ранних сроках.

    Антитела ХГЧ были обнаружены при ряде обстоятельств.1) Было показано, что вакцинация против ХГЧ блокирует фертильность у мартышек, бабуинов и макак-резусов (1). Кроме того, клинические испытания продемонстрировали, что иммунизация женщин либо ХГЧβ, гетероспецифическим димером ХГЧ, связанным с α-субъединицей ЛГ овцы, либо С-концевой областью ХГЧβ, приводила к развитию контрацептивных уровней антител к ХГЧ. (2–4). Исследование Talwar et al. (3) также предоставил доказательства того, что циркулирующие антитела к ХГЧ предотвращали беременность в 1224 циклах и что для поддержания титров антител требовались бустерные инъекции. Фертильность восстанавливалась, когда титры (нейтрализующая способность антитела) падали ниже 35 нг ХГЧ / мл сыворотки. 2) антитела к ХГЧ были обнаружены у молодых мужчин, получавших экзогенный ХГЧ в моче (5, 6). 3) О наличии естественных антител к ХГЧ / ЛГ также сообщалось у молодых женщин. Wass et al. (7) описал присутствие антител к ХГЧ / ЛГ в нормальной сыворотке, но это сродство было слишком низким, чтобы влиять на биологическую активность. Впоследствии сообщалось, что у женщины в анамнезе был самопроизвольный аборт с последующим ановулярным периодом, а затем нормальными овуляторными циклами и вариациями титров ХГЧ / ЛГ в ее сыворотке (8).Пациент ранее не подвергался гормональной терапии.

    Мы описываем случай 30-летней женщины с необъяснимым бесплодием, у которой развились нейтрализующие антитела к ХГЧ, которые, по-видимому, поддерживались многократным воздействием экзогенного и эндогенного ХГЧ. Это мешало лечению оплодотворением in vitro (ЭКО), блокируя действие экзогенного ХГЧ.

    Отчет о болезни

    Пациентка в возрасте 16 лет имела самопроизвольную беременность, протекающую без осложнений, с нормальными естественными родами.После 3-летнего периода контрацепции пациентка несколько лет пыталась забеременеть. При обследовании бесплодия у нее была выявлена ​​овуляция, нормальная проходимость матки и маточных труб, а анализ спермы у ее партнера был удовлетворительным. Пациентка прошла три цикла стимулированного ЭКО с использованием агониста ГнРГ, менопаузального гонадотропина человека и ХГЧ (10 000 МЕ). В каждом случае большое количество фолликулов развивалось с соответствующими концентрациями E2 в сыворотке. Ооциты никогда не получали, а аспираты состояли только из прозрачной жидкости со здоровыми скоплениями гранулезных клеток.Пациентам посоветовали рассмотреть возможность использования донорских ооцитов. Это было неприемлемо, и они связались с отделением репродуктивной медицины Университета Аделаиды.

    После циклов ЭКО были задокументированы свидетельства по крайней мере семи случаев, когда тест на ХГЧ на беременность был положительным. Плод не был замечен ни на одном этапе, и считалось, что у пациентки были повторные выкидыши. Тем не менее, уровень ХГЧ сохранялся в течение нескольких месяцев после выкидыша.Дальнейшие анализы выявили низкий титр антикардиолипинового IgM, нормальный уровень активированного протеина C и пограничный уровень 64% для протеина S. Электрофоретический рисунок общего протеина оказался нормальным при визуальной оценке, и только уровень IgM оказался повышенным. (3,61 г / л; нормальный диапазон 0,5–3,0 г / л). Пациентка наблюдалась в течение одного менструального цикла, и было показано, что овуляция наступила на 19-й день цикла с отличным прогестероновым ответом, но повышенным уровнем ЛГ (21–26 МЕ / литр).На следующем цикле был замечен один большой фолликул, и пациенту был введен ХГЧ (10 000 МЕ). Через 14 дней тест на беременность был положительным, но в течение нескольких недель уровень ХГЧ медленно снижался. Впоследствии пациентке было проведено несколько циклов внутриматочной инсеминации с легкой стимуляцией яичников рекомбинантным ФСГ (Пурегон, 50 МЕ; N.V. Organon, Осс, Нидерланды). В каждом случае вводили ХГЧ (5000 МЕ) и получали положительный тест на беременность, но со снижением уровня ХГЧ в течение нескольких недель.Во всех случаях у пациентки был менструальный цикл в ожидаемое время. В последующих циклах внутриматочного осеменения ХГЧ не применялся, и произошла спонтанная овуляция. Тесты на беременность всегда были отрицательными. На этом этапе пациент был исследован на антитела к ХГЧ.

    Материалы и методы

    Реактивы

    Трансформированная линия клеток Лейдига, МА10, была предоставлена ​​доктором М. Асколи (Университет штата Айова, Эймс, Айова). Рекомбинантный человеческий CG (r-hCG; Ovidrel) и рекомбинантный человеческий LH (r-hLH, Luveris) были предоставлены Serono Australia Pty. Ltd. (Френч Форрест, Австралия). Рекомбинантный человеческий ФСГ (r-hFSH, Gonal-F) был приобретен у Serono Australia Pty. Ltd. hCGβ, первый международный эталонный препарат 75/551, был получен из Национального института биологических стандартов (Лондон, Великобритания). Свободные α- и β-субъединицы ХГЧ были предоставлены Национальной программой по гормонам и гипофизу NIDDK, NIH, Школа медицины Университета Мэриленда (Балтимор, Мэриленд). [ 125 I] r-ХГЧ был получен методом хлорамина-Т с результирующей удельной активностью 121–150 кБк / пмоль.

    Иммуноферментный анализ на ХГЧ

    ХГЧ измеряли в сыворотке или плазме с помощью иммунометрического анализа общего ХГЧβ с использованием набора реагентов Vitros Total β-hCG (Ortho-Clinical Diagnostics, Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK) в автоматизированной иммунодиагностической системе Vitros. По данным производителя, перекрестная реактивность ТТГ (250 мМЕ / литр), ЛГ (400 МЕ / литр) и ФСГ (400 МЕ / литр) составляла менее 5%, менее 5% и менее 10%, соответственно. ХГЧ в моче измеряли с помощью того же анализа после того, как образец концентрировали в 30 раз с помощью ультрафильтрации (мембрана Omega, отсекающая молекулярную массу 3 кДа, лаборатория Pall Gelman, Сидней, Австралия).Результаты были подтверждены анализом общего β-ХГЧ Abbott ARCHITECT (Abbott Laboratories, Чикаго, Иллинойс).

    Очистка IgG

    Сыворотка (3 мл) с уровнями ХГЧ менее 5 МЕ / литр была загружена в колонку с белком G (1 мл; HiTrap, Amersham Pharmacia Biotech, Упсала, Швеция), предварительно уравновешена и обработана 20 мМ фосфатом натрия, pH 7,0. , при скорости потока 0,5 мл / мин. Колонку промывали тем же буфером (5 мл), а затем IgG элюировали 100 мМ глицин-HCl, pH 2.7. Фракции с IgG объединяли, концентрировали и обессоливали с использованием центробежного концентратора Macrosep с мембраной, отсекающей молекулярную массу 10 кДа (Pall Filtron, Northborough, MA). IgG определяли количественно с помощью Micro BCA Protein Assay (Pierce Chemical Co. , Rockford, IL), используя BSA в качестве стандарта.

    Гель-фильтрация

    Сыворотка (1 мл) с эндогенным ХГЧ подвергали гель-фильтрации на колонке Superdex 75 (1,6 × 60 см; Amersham Pharmacia Biotech), предварительно уравновешивали и прогоняли с бикарбонатом аммония 150 мМ при скорости потока 1 мл / мин.Фракции объемом 1 миллилитр собирали, обессоливали, лиофилизировали и восстанавливали в 250 мкл 50 мМ фосфатного буфера, pH 7,4, с 150 мМ NaCl и 0,5% BSA. Фракции анализировали на иммунореактивность ХГЧ. Сыворотку (200 мкл) или IgG (200 мкл; 8,5 мг), инкубированные с 12 мкл [ 125 I] r-hCG (700000 имп / мин) в течение 18 ч при 4 ° C, подвергали гель-фильтрации на колонке Superose 12 ( 1 × 30 см; Amersham Pharmacia Biotech), предварительно уравновешивают и запускают с тем же буфером, как описано выше, при скорости потока 0.5 мл / мин. Затем фракции оценивали на активность [ 125 I] r-ХГЧ.

    Электрофорез и вестерн-блоттинг

    Белки сыворотки и IgG, очищенные из той же сыворотки, разделяли прерывистым SDS-PAGE в 6% гелях в невосстанавливающих условиях по методу Лэммли (9). Затем белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану (0,4 мкм; Bio-Rad Laboratories, Inc., Regent Park, Australia), используя процедуру, описанную Towbin et al. (10). Мол. Вес. Определяли путем сравнения с предварительно окрашенными белками Precision Standard (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Полосы IgG были идентифицированы путем инкубации мембраны (предварительно заблокированной 5% BSA) с античеловеческим IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена (1:20 000; Amersham Pharmacia Biotech), в течение 1 ч при комнатной температуре, обработанной реагентами повышенной хемилюминесценции (ECL) (Amersham Pharmacia Biotech) и подвергали воздействию Hyperfilm ECL (Amersham Pharmacia Biotech). Способность разделенных белков связывать [ 125 I] r-hCG оценивали путем инкубации нитроцеллюлозной мембраны с [ 125 I] r-hCG (80 000 имп / мин / мл) в PBS-BSA в течение 18 часов при 4 ° C. с последующей обработкой Hyperfilm MP (Amersham Pharmacia Biotech) в течение 72 часов при -80 ° C.

    Биологический анализ

    Способность сыворотки или IgG пациента нейтрализовать биоактивность ХГЧ определяли с помощью биоанализа in vitro с использованием трансформированной линии мышиных клеток Лейдига MA10 (11), как ранее описано Simula et al. (12). Вкратце, стандарты (r-hCG; 100 мкл) или r-hCG, предварительно обработанные различными количествами сыворотки или IgG, инкубировали со 100 мкл клеточной суспензии (0,5 × 10 5 клеток / лунку) в планшете для микротитрования (Costar, Кембридж, Массачусетс) в течение 2 ч при 37 ° C в 5% CO 2 /95% воздуха.Прогестерон, продуцируемый и секретируемый в среду, измеряли с использованием набора RIA от Diagnostics Systems Laboratories, Inc. (Webster, TX). Биоактивность всех образцов оценивалась в рамках одного анализа, чтобы избежать любых вариаций между анализами.

    Характеристики антисыворотки

    Титр антитела оценивали путем инкубации разведений сыворотки (50 мкл) в течение 18 часов при 4 ° C с [ 125 I] r-hCG (30 000 имп / мин; SA, 121 кБк / пмоль) и 0,015 м фосфата, pH 7. .4, с 0,15 м NaCl, 0,05% BSA и 0,05% азида натрия в общем объеме анализа 200 мкл. Связанный с IgG [ 125 I] r-hCG осаждали 25% полиэтиленгликолем 6000 в PBS (500 мкл) и разделяли центрифугированием с последующей аспирацией супернатанта. Количество антисыворотки, связывающей 50% [ 125 I] r-ХГЧ, использовали в RIA для определения специфичности и аффинности антисыворотки. Специфичность антисыворотки оценивали путем сравнения вытеснения [ 125 I] r-hCG увеличением доз r-hCG, свободного hCGα, свободного hCGβ, r-hFSH и r-hLH.Данные кривой доза-ответ r-hCG использовали для определения связывающей способности и аффинности антисыворотки с помощью анализа Скэтчарда (13).

    Результаты

    Было показано, что в сыворотке присутствует

    hCG, о чем судили по обнаружению в двух различных анализах общего hCGβ (Vitros и Abbott ARCHITECT) и параллелизму разведений стандарта и образца в анализе. Хотя ХГЧ был обнаружен в сыворотке крови, его не было обнаружено в 24-часовом образце мочи, собранном в то же время.

    Профиль элюции Superdex 75 иммунореактивности сыворотки крови пациентки сравнивали с профилем нормальной беременной женщины с эквивалентным уровнем ХГЧ. Результаты, представленные на рис. 1, демонстрируют, что пик иммунореактивности ХГЧ из сыворотки пациента элюируется во фракциях 41-51 с кажущейся молекулярной массой более 70 кДа (вне диапазона разделения колонки) и больше, чем иммунореактивность ХГЧ контрольный субъект, который элюировал во фракциях 52–65 (кажущаяся молекулярная масса 67 кДа).Чтобы изучить возможность связывания ХГЧ с белком сыворотки, сыворотки, собранные как у пациента, так и у контрольного субъекта, инкубировали с [ 125 I] r-ХГЧ в течение 18 часов при 4 ° C и хроматографировали на колонке Superose 12. Результаты на фиг. 2А показывают, что радиоактивный пик [ 125 I] r-ХГЧ элюируется раньше (пик активности во фракции 23) при инкубации с сывороткой пациента по сравнению с при инкубации с контрольной сывороткой (пик активности во фракциях). 28–29). Сходные результаты были получены при одинаковой обработке IgG, очищенного из одной и той же сыворотки (рис.2B), что свидетельствует о наличии антитела против ХГЧ. Это также подтверждается результатами SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Разрешение сывороточных белков и соответствующих им очищенных с помощью аффинности IgG показано на фиг. 3A. Иммунодетекция полос IgG в сыворотке и очищенном IgG после SDS-PAGE и переноса на нитроцеллюлозную мембрану показала, что они имеют молекулярные массы в диапазоне 112–190 кДа (рис. 3B). Было показано, что полосы с молекулярными массами от 112 до 138 кДа, соответствующие части полос IgG в сыворотке и очищенному IgG пациента, связывают [ 125 I] r-hCG (рис.3C, дорожки 1 и 3 соответственно). Для сравнения, ни контрольная сыворотка (фиг. 3C, дорожка 2), ни контрольный IgG (фиг. 3C, дорожка 4) не связались с [ 125 I] r-hCG.

    Рисунок 1.

    Профили элюирования иммунореактивности ХГЧ, когда сыворотки подвергали гель-хроматографии на колонке Superdex 75 (16/60), предварительно уравновешивали и прогоняли с бикарбонатом аммония 150 мм.

    Рисунок 1.

    Профили элюирования иммунореактивности ХГЧ, когда сыворотки подвергали гель-хроматографии на колонке Superdex 75 (16/60), предварительно уравновешивали и прогоняли с бикарбонатом аммония 150 мМ.

    Рисунок 2.

    Профили элюции [ 125 I] r-hCG, который инкубировали либо с сывороткой (A), либо с IgG (B), очищали из тех же сывороток и подвергали гель-хроматографии на колонке Superose 12. , предварительно уравновешивают и запускают с бикарбонатом аммония 150 мМ. Стрелка указывает положение элюирования [ 125 I] r-hCG.

    Рис. 2.

    Профили элюции [ 125 I] r-hCG, который инкубировали либо с сывороткой (A), либо с IgG (B), очищенными из тех же сывороток и подвергали гель-хроматографии на Superose 12. колонку, предварительно уравновешенную и работающую с бикарбонатом аммония 150 мм.Стрелка указывает положение элюирования [ 125 I] r-hCG.

    Рисунок 3.

    A, Двенадцатипроцентный SDS-PAGE сыворотки пациента (дорожка 1), контрольной сыворотки (дорожка 2), IgG пациента (дорожка 3) и контрольного IgG (дорожка 4) в условиях невосстановления, за которыми следует Кумасси синий окрашивание. B, Вестерн-блоттинг тех же образцов, что и в A, с последующим иммуноокрашиванием с использованием античеловеческих IgG и детектирования ECL путем воздействия Hyperfilm ECL. C — Вестерн-блоттинг тех же образцов с последующей инкубацией с [ 125 I] r-hCG и воздействием Hyperfilm MP.

    Рисунок 3.

    A, Двенадцатипроцентный SDS-PAGE сыворотки пациента (дорожка 1), контрольной сыворотки (дорожка 2), IgG пациента (дорожка 3) и контрольного IgG (дорожка 4) в условиях невосстановления, за которыми следует Кумасси. синее окрашивание. B, Вестерн-блоттинг тех же образцов, что и в A, с последующим иммуноокрашиванием с использованием античеловеческих IgG и детектирования ECL путем воздействия Hyperfilm ECL. C — Вестерн-блоттинг тех же образцов с последующей инкубацией с [ 125 I] r-hCG и воздействием Hyperfilm MP.

    ХГЧ-индуцированная стимуляция выработки прогестерона клетками MA10 in vitro , как было показано, ингибируется добавлением возрастающих доз любой инактивированной нагреванием сыворотки (рис. 4A) или IgG, очищенный из сыворотки крови пациента (рис. 4B). Инактивированная нагреванием сыворотка и IgG добавляли к r-hCG (конечная концентрация 20 680 МЕ / литр) перед добавлением к клеткам MA10. Полное ингибирование было достигнуто с менее чем 12,5 мкл сыворотки или 880 мкг / мл (176 мкг / лунка) общего IgG. Однако инактивированная нагреванием сыворотка и IgG от контрольного субъекта не оказывали ингибирующего действия.

    Рисунок 4.

    Влияние инактивированной нагреванием сыворотки (A) и IgG (B) на индуцированную ХГЧ стимуляцию выработки прогестерона трансформированной линией мышиных клеток Лейдига MA10.

    Фигура 4.

    Влияние инактивированной нагреванием сыворотки (A) и IgG (B) на индуцированную ХГЧ стимуляцию выработки прогестерона трансформированной линией мышиных клеток Лейдига MA10.

    Специфичность антисыворотки была продемонстрирована путем инкубации сыворотки, разведенной 1:12, с постоянным количеством [ 125 I] r-hCG и увеличивающимися количествами r-hCG, r-hFSH, r-hLH, hCGα. , и ХГЧβ. Перекрестная реактивность r-hFSH, r-hLH, hCGα и hCGβ была менее 0,019%, 0,021%, 0,039% и 0.006% на молярной основе, соответственно. Данные кривой связывания доза-ответ r-hCG, построенные по методу Скэтчарда (рис. 5), показали наличие антисыворотки с низким сродством к r-hCG (K a , 1,4 × 10 6 литр / моль), но высокая связывающая способность 418 нмоль / л.

    Рис. 5.

    График Скэтчарда данных конкурентного связывания r-hCG с использованием 50 мкл сыворотки пациента (разведенной 1:12) со 100 мкл [ 125 I] r-hCG (0.00656 пмоль; SA, 150 кБк / пмоль) в присутствии возрастающих количеств немеченого r-hCG (0,013–26,3 пмоль) и с поправкой на неспецифическое связывание. Общее количество сайтов связывания составляет 418 нмоль / литр неразбавленной сыворотки, а константа аффинности (K a ) составляет 1,4 × 10 6 литров / моль.

    Рисунок 5.

    График Скэтчарда данных конкурентного связывания r-hCG с использованием 50 мкл сыворотки пациента (разведенной 1:12) со 100 мкл [ 125 I] r-hCG (0,00656 пмоль; SA, 150 кБк / пмоль), в присутствии возрастающих количеств немеченого r-hCG (0. 013–26,3 пмоль) с поправкой на неспецифическое связывание. Общее количество сайтов связывания составляет 418 нмоль / литр неразбавленной сыворотки, а константа аффинности (K a ) составляет 1,4 × 10 6 литров / моль.

    Обсуждение

    Противоречивые отчеты описывают присутствие (7) и отсутствие (14) антител ХГЧ в нормальной сыворотке человека. Исследование Johnson et al. (14) также продемонстрировал отсутствие таких антител в сыворотке крови группы бесплодных женщин.Хотя несколько исследователей предположили, что аутоиммунитет к гонадотропинам может быть причиной гонадной недостаточности (15), нам известен только один случай, описывающий наличие аутоантител к ХГЧ / ЛГ, которые, как предполагалось, были причиной бесплодия у 32- летняя женщина (8). В этом случае пациентка ранее не подвергалась гормональной терапии и после самопроизвольного аборта имела антитела с высоким сродством к ХГЧ (K a ,> 2 × 10 10 л / моль) и ЛГ (K a ,> 0. 5 × 10 10 л / моль), а также высокая связывающая способность ХГЧ (максимальная, 2000 нг [ 125 I] связанного ХГЧ / мл сыворотки). Когда овуляторные циклы возобновились, связывающая способность для [ 125 I] ХГЧ снизилась до 1 нг / мл сыворотки, а сродство к ЛГ снизилось. Мы обнаружили наличие антитела ХГЧ в сыворотке крови пациента с 9-летним необъяснимым вторичным бесплодием. Титр оставался стабильным в течение периода наблюдения (6 месяцев) после последнего обнаруженного ХГЧ (результаты не показаны).В отличие от предыдущего случая, антисыворотка имела более низкое сродство (K a , 1,4 × 10 6 л / моль), но более высокую связывающую способность (418 нмоль / л сыворотки; 348 333 МЕ / л). Этой связывающей способности было достаточно, чтобы нейтрализовать предполагаемый уровень эндогенного ХГЧ 135 МЕ / л во время периимплантации (4) и даже максимальные уровни ХГЧ в сыворотке 187 МЕ / л, зарегистрированные после подкожной инъекции экзогенного ХГЧ (5000 МЕ), как правило используется для индукции овуляции (16). Невозможность восстановить какие-либо ооциты из нескольких фолликулов в трех циклах ЭКО свидетельствовала о незрелом комплексе кумулюс-ооцит, вероятно, из-за блокирования введенного экзогенного ХГЧ антителом.Способность сыворотки пациента нейтрализовать биологическую активность ( in vitro ) ХГЧ на уровнях, превышающих уровни, обнаруженные во время периимплантации, является дополнительным доказательством того, что антитело ХГЧ было основной причиной самопроизвольных абортов у пациента. Тот факт, что антитело было специфичным для интактной гетеродимерной молекулы ХГЧ с низкой перекрестной реакцией с α- и β-субъединицами, предполагает, что антитело должно связываться с сайтом, охватывающим обе субъединицы, что важно для распознавания рецептора.Отсутствие детектируемого ХГЧ в моче пациента предоставило дополнительное доказательство того, что иммунореактивный сывороточный ХГЧ был связан с антителом. Образование такого комплекса с высокой молекулярной массой предотвратит фильтрацию через почки, которые являются основным органом, ответственным за деградацию и / или выведение ХГЧ (17), и объяснит его сохранение в сыворотке. Низкая перекрестная реакция с ЛГ или ФСГ позволила пациенту иметь нормальный овулярный цикл и вызвать беременность.

    Клинические испытания вакцинации против ХГЧ показали, что уровни противозачаточных антител ХГЧ снижаются в отсутствие бустерных инъекций, что указывает на обратимость процесса (1, 2).Хотя источник антигена в нашем исследовании неизвестен, длительный период бесплодия предполагает, что ХГЧ, вводимый во время различных курсов лечения, и / или ХГЧ, продуцируемый спонтанной беременностью, были иммуногенными усилителями, которые поддерживали титр антител. С другой стороны, эндогенный ХГЧ пациента может стать иммуногенным в результате структурных изменений, возможно, вызванных мутацией в одном из генов ХГЧ. Однако мы не секвенировали кластеры генов CGβ. Таким образом, был сделан вывод, что высокая связывающая способность антитела против ХГЧ была основной причиной бесплодия пациентки, и единственным возможным вариантом для пациентки было гестационное суррогатное материнство.

    Благодарности

    Мы благодарим г-жу Мишель Коло и г-на Томаса А. Гилмора за их техническую поддержку.

    Сокращения:

    • ECL,

      Усиленная хемилюминесценция;

    • hLH,

    • IVF,

    • r-hCG,

    1

    Hearn

    JP

    1978

    Иммунологическое вмешательство в распознавание беременностью у приматов.

    Ciba Found Symp

    64

    :

    353

    375

    2

    Singh

    O

    ,

    Rao

    LV

    ,

    Gaur

    A

    ,

    Sharma

    NC Alam A,

    NC Alam A,

    Talwar

    GP

    1989

    Ответ антител и характеристики антител у женщин, иммунизированных тремя противозачаточными вакцинами, индуцирующими антитела против хорионического гонадотропина человека.

    Fertil Steril

    52

    :

    739

    744

    3

    Talwar

    GP

    ,

    Singh

    O

    ,

    Pal

    R

    ,

    Chatterjee

    N

    ,

    Chatterjee

    N

    ,

    P

    ,

    Dhall

    K

    ,

    Kaur

    J

    ,

    Das

    SK

    ,

    Suri

    S

    ,

    Buchshee

    K

    ,

    Saraya

    L

    Na

    2

    72 S

    1994

    Вакцина, предотвращающая беременность у женщин.

    Proc Natl Acad Sci USA

    91

    :

    8532

    8536

    4

    Джонс

    WR

    ,

    Брэдли

    J

    ,

    Джадд

    SJ

    H,

    Денхолм

    Денхолм

    Ing

    RMY

    ,

    Mueller

    UW

    ,

    Powell

    J

    ,

    Griffin

    PD

    ,

    Stevens

    VC

    1988

    Фаза 1 клинических испытаний контрольной вакцины Всемирной организации здравоохранения

    .

    Ланцет

    1295

    1298

    5

    Клаустрат

    B

    ,

    Дэвид

    L

    ,

    Faure

    A

    ,

    Франсуа

    R

    1983

    Развитие антигуманного мышления антитела к гонадотропинам у пациентов с гипогонадотропным гипогонадизмом. Исследование четырех пациентов.

    J Clin Endocrinol Metab

    57

    :

    1041

    1047

    6

    Сокол

    RZ

    ,

    McClure

    RD

    ,

    Peterson

    M

    000,

    9172 9172

    RS

    Swerdloff

    Неудача терапии гонадотропинами, вторичная по отношению к антителам, индуцированным хорионическим гонадотропином.

    J Clin Endocrinol Metab

    52

    :

    929

    933

    7

    Wass

    M

    ,

    McCann

    K

    ,

    Baghawe

    KD

    1978

    Изоляция антител HCG

    / ЛГ из сывороток человека.

    Nature

    274

    :

    368

    370

    8

    Pala

    A

    ,

    Coghi

    I

    ,

    Spampinato

    G

    ,

    Di Gregorio

    Strom

    R

    R

    ,

    Carenza

    L

    1988

    Иммунохимические и биологические характеристики человеческого аутоантитела к хорионическому гонадотропину и лютеинизирующему гормону человека.

    J Clin Endocrinol Metab

    67

    :

    1317

    1321

    9

    Laemmli

    UK

    1970

    Расщепление структурных белков во время сборки головки бактериофага Т4.

    Nature

    227

    :

    680

    685

    10

    Towbin

    H

    ,

    Staehelin

    T

    ,

    Gordon

    J

    1979

    Электрофоретический перенос полифоретических белков листы нитроцеллюлозы: порядок действий и некоторые применения.

    Proc Natl Acad Sci USA

    76

    :

    4350

    4357

    11

    Ascoli

    M

    1981

    Характеристика нескольких клональных линий культивируемых опухолевых клеток Лейдига: гонадотропиновые рецепторы и стероидогенные реакции.

    Эндокринология

    108

    :

    88

    95

    12

    Simula

    AP

    ,

    Amato

    F

    ,

    Faast

    R

    ,

    Lopata

    A

    ,

    Berka

    ,

    Norman

    RJ

    1995

    Биоактивность лютеинизирующего гормона / хорионического гонадотропина у обыкновенной мартышки ( Callithrix jacchus ) обусловлена ​​хорионической молекулой гонадотропина человека со структурой, промежуточной между человеческим хорионизирующим гормоном и хорионизирующим гормоном.

    Biol Reprod

    53

    :

    380

    389

    13

    Скэтчард

    G

    1949

    Притяжение белков для малых молекул и ионов.

    Ann NY Acad Sci

    51

    :

    660

    672

    14

    Johnson

    PM

    ,

    Cheng

    HM

    ,

    Stevens

    VC

    ,

    Matangkasombut

    Matangkasombut

    Реактивность антител против трофобластов и продуктов трофобластов.

    J Reprod Immunol

    8

    :

    347

    352

    15

    Gleicher

    N

    1998

    Аутоантитела при бесплодии: актуальное мнение.

    Обновление Hum Reprod

    4

    :

    169

    176

    16

    Saal

    W

    ,

    Glowania

    HJ

    ,

    Hengst

    W

    ,

    Happ

    J

    1991

    Фармакодинамика и фармакокинетика после подкожного и внутримышечного введения хорионического гонадотропина человека.

    Fertil Steril

    56

    :

    225

    229

    17

    Nisula

    BC

    ,

    Blithe

    DL

    ,

    Akar

    A

    ,

    Lefort

    G

    ,

    Wehmann RE

    1989

    Метаболическая судьба хориогонадотропина человека.

    J Steroid Biochem

    33

    :

    733

    737

    Авторские права © 2002 Эндокринное общество

    Избегание неправильных клинических решений, основанных на ложноположительных результатах теста на хорионический гонадотропин человека

    Номер 278 (Подтверждено в 2020 г. )

    Комитет по гинекологической практике

    В этом документе отражены клинические и научные достижения на дату выпуска, и в него могут быть внесены изменения.Информация не должна толковаться как предписывающая исключительный курс лечения или процедуры.


    РЕФЕРАТ:
    Клинически значимые ложноположительные результаты теста на хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) встречаются редко. Однако у некоторых людей в сыворотке крови есть циркулирующие факторы (например, гетерофильные антитела или неактивные формы ХГЧ), которые взаимодействуют с антителом ХГЧ и вызывают необычные или неожиданные результаты тестов.Ложноположительные и ложноотрицательные результаты анализов могут быть получены с любым образцом, поэтому следует проявлять осторожность, если клинические данные и результаты лабораторных исследований противоречат друг другу. Методы исключения присутствия мешающих веществ включают использование анализа мочи, повторный запуск анализа с серийными разведениями сыворотки, предварительную абсорбцию сыворотки и использование другого анализа. Врачи должны решить, перевешивают ли риски ожидания подтверждения результатов риски непринятия немедленных медицинских мер. Пациентов следует уведомить, если они подвержены риску повторных ложноположительных результатов теста на ХГЧ, и эту информацию следует включить в медицинскую карту пациента.


    Клиническое ведение многих гинекологических состояний значительно улучшилось за последние десятилетия благодаря разработке очень чувствительных и высокоспецифичных тестов на гормоны, в частности хорионический гонадотропин человека (ХГЧ). Эти анализы произвели революцию в ведении внематочной беременности и гестационной трофобластической болезни, которые теперь имеют значительно более низкий уровень смертности в результате способности количественно определять циркулирующий (сывороточный) и мочевой ХГЧ.

    Благодаря технологическим усовершенствованиям, анализы ХГЧ теперь способны определять наличие беременности до пропущенного менструального цикла.Жизненно важно помнить, что, несмотря на технический прогресс, возможности лабораторных измерений для надлежащего руководства клиницистом в любых обстоятельствах ограничены 1 2 3. Цель этого заключения Комитета — предложить рекомендации по более эффективному управлению ситуациями, в которых анализы ХГЧ могут дать ложноположительные результаты.

    У некоторых людей в сыворотке есть циркулирующие факторы, которые взаимодействуют с антителами к ХГЧ. Наиболее распространены гетерофильные антитела. Это человеческие антитела, направленные против антигенов животного происхождения, используемые в иммуноанализах 1 4 5 6 7 8 9.Гетерофильные антитела с большей вероятностью разовьются у лиц, которые работали лаборантами-животными или в ветеринарных учреждениях или выращивались на фермах. Для всех видов иммуноанализов используются антитела животных. Люди с гетерофильными антителами могут иметь необычные результаты в ряде различных анализов. Однако, поскольку антитела животных используются в разных количествах и с другими реагентами в каждой системе анализа, человек с гетерофильными антителами не всегда будет иметь необычный или неожиданный результат.Результаты могут отличаться в зависимости от конкретного используемого анализа.

    Клинически значимые ложноположительные результаты встречаются редко. В одном отчете отмечалось, что 5 из 162 обследованных женщин имели доказательства вмешательства в анализ, достаточные для предоставления вводящих в заблуждение результатов 10. Если результаты вводят в заблуждение, они обычно отображаются со значениями ниже 1000 мМЕ / мл. Чтобы исключить присутствие гетерофильных антител или других мешающих веществ, можно использовать несколько методов:

    • Можно провести анализ мочи (количественный или качественный) на ХГЧ.Поскольку гетерофильные антитела не присутствуют в моче, если результат анализа мочи отрицательный, а результат анализа сыворотки устойчиво положительный, вмешательство в иммуноанализ сыворотки подтверждается, если значение сыворотки ≥50 мМЕ / мл 3.

    • Анализ можно повторить с помощью серийных разведений сыворотки. Поскольку в иммуноанализе гетерофильные антитела направлены на реагенты, а не на ХГЧ, их взаимодействие с кривой ХГЧ не будет линейным. Отсутствие линейности подтверждает влияние анализа.

    • Некоторые лаборатории могут предварительно абсорбировать сыворотку для удаления гетерофильных антител перед проведением анализа. Если после удаления гетерофильного антитела результат становится отрицательным, интерференция может быть подтверждена 11.

    Существуют другие способы, которыми количество «истинного» ХГЧ может быть измерено по-другому или даже неправильно с помощью иммуноанализа. Размер молекулы ХГЧ, циркулирующей в крови людей, может варьироваться в результате различий в структуре белков и углеводов ХГЧ.Этот тип вариации называется микрогетерогенности ХГЧ, и иногда он может объяснять различия в измерениях, сообщаемых различными анализами. Кроме того, некоторые люди могут продуцировать аберрантные формы ХГЧ, которые не являются биологически активными — или полностью представляют собой другие гормоны, — которые будут перекрестно реагировать с анализами ХГЧ. Третьи могут частично расщеплять циркулирующий ХГЧ до небиологически активных форм, которые по-разному реагируют с различными системами анализа. В этих обстоятельствах другие вещества, кроме природного, биологически активного ХГЧ, могут распознаваться системой анализа.Лучше всего обнаружить эту проблему можно, повторив измерение ХГЧ в другой системе анализа.

    Широкие различия между повторными запусками одного и того же анализа могут возникнуть из-за факторов сыворотки, мешающих анализу. Последовательное разбавление образца поможет документировать нелинейность и подтвердить наличие помех.

    Наконец, собственные факторы анализа могут привести к ложноположительным результатам по ХГЧ. Повторное тестирование с использованием другой системы анализа может подтвердить, что результат был ложноположительным, если теперь результат отрицательный.

    Пациенты с признаками интерференции анализа ХГЧ должны быть уведомлены о том, что они подвержены риску повторных ложноположительных результатов анализа ХГЧ. Этих пациентов следует проинструктировать об информировании всех будущих практикующих врачей об этой проблеме, и эта информация должна быть включена в медицинскую карту пациента.

    Таким образом, современные методы анализа почти устранили лабораторные ошибки. Однако ложноположительные и ложноотрицательные результаты могут быть получены с любым образцом. Следует проявлять осторожность, если клинические данные и результаты лабораторных исследований противоречат друг другу.Хотя ложноположительные результаты сывороточного ХГЧ встречаются редко, если их не распознать, они могут привести к необоснованному клиническому вмешательству при таких состояниях, как стойкая трофобластическая болезнь. Врач должен решить, перевешивают ли риски ожидания подтверждения результатов риски неприменения немедленных действий.

    Copyright © Ноябрь 2002 г., Американский колледж акушеров и гинекологов. Все права защищены. Никакая часть этой публикации не может быть воспроизведена, сохранена в поисковой системе или передана в любой форме и любыми средствами, электронными, механическими, путем ксерокопирования, записи или иными способами, без предварительного письменного разрешения издателя.

    Запросы на разрешение на изготовление ксерокопий следует направлять по адресу:

    Центр проверки авторских прав 222 Rosewood Drive, Danvers, MA 01923, (978) 750-8400

    ISSN 1074-861X

    Американский колледж акушеров и гинекологов 409 12th Street, SW, PO Box 96920, Вашингтон, округ Колумбия 20090-6920

    Как избежать принятия неправильных клинических решений на основании ложноположительных результатов теста на хорионический гонадотропин человека. Заключение Комитета ACOG № 278.Американский колледж акушеров и гинекологов. Obstet Gynecol 2002; 100: 1057-9.

    Человеческое антитело против хорионического гонадотропина альфа / бета (ХГЧ) MAB97701-100: R&D Systems

    Краткое описание антител к хорионическому гонадотропину альфа / бета (ХГЧ) человека

    Специфичность

    Обнаруживает человеческий хорионический гонадотропин альфа / бета (ХГЧ) и человеческий ХГ альфа с помощью прямого ELISA.

    Источник

    Рекомбинантный моноклональный клон кроличьего IgG # 1177B

    Очистка

    Белок A или G, очищенный из супернатанта клеточной культуры

    Иммуноген

    Клеточная линия яичника китайского хомячка, хорионический гонадотропин альфа / бета (ХГЧ), происходящий из СНО, и человеческий CG альфа
    Ser21-Gln165 и Ala25-Ser116
    Регистрационный номер P01233 и P01215

    Состав

    Лиофилизированный из 0. 2 мкм фильтрованный раствор в PBS с трегалозой. * Небольшая упаковка (SP) поставляется в виде отфильтрованного раствора 0,2 мкм в PBS.

    Приложения

    Рекомендуемая концентрация

    Образец

    ELISA

    Это антитело функционирует как захватывающее антитело ELISA в сочетании с кроличьим моноклональным антителом против хорионического гонадотропина человека альфа / бета (ХГЧ) (№ по каталогу MAB97702).

    Этот продукт предназначен для разработки анализов на различных платформах анализа, требующих пар антител. Мы рекомендуем комплект Human CG beta (HCG beta) DuoSet ELISA Kit (Каталожный № DY9034-05 ) для удобной разработки сэндвич-ELISA.

    Обратите внимание: оптимальные разведения должны определяться каждой лабораторией для каждого применения.
    Общие протоколы
    доступны в разделе «Техническая информация» на нашем сайте.

    Пример данных

    Стандартная кривая ELISA на хорионический гонадотропин альфа / бета (ХГЧ).
    Рекомбинантный белок хорионического гонадотропина а / бета (ХГЧ) был серийно разбавлен в 2 раза и захвачен мышиным моноклональным антителом против хорионического гонадотропина а / бета (ХГЧ) (каталожный номер MAB97701), нанесенным на микропланшет из прозрачного полистирола (каталожный номер DY990) .Кроличьи моноклональные антитела против хорионического гонадотропина а / бета (ХГЧ) (каталожный № MAB97702) биотинилировали и инкубировали с белком, захваченным на планшете. Определение стандартной кривой было достигнуто путем инкубации стрептавидин-HRP (Каталожный № DY998), затем раствора субстрата (Каталожный № DY999) и остановки ферментативной реакции стоп-раствором (Каталожный № DY994).

    Калькулятор восстановления

    Калькулятор восстановления

    Подготовка и хранение

    Восстановление

    Восстановить на 0.5 мг / мл в стерильном PBS.

    Доступен буфер восстановления

    Доставка

    Изделие транспортируется при температуре окружающей среды. После получения немедленно храните его при температуре, рекомендованной ниже. * Малый размер упаковки (SP) поставляется с полярными упаковками. После получения сразу же хранить при температуре от -20 до -70 ° C.

    Стабильность и хранение

    Используйте морозильную камеру для ручного размораживания и избегайте повторяющихся циклов замораживания-оттаивания.

    • 12 месяцев с даты получения, от -20 до -70 ° C в состоянии поставки.
    • 1 месяц, от 2 до 8 ° C в стерильных условиях после разведения.
    • 6 месяцев, от -20 до -70 ° C в стерильных условиях после восстановления.

    Справочная информация: хорионический гонадотропин альфа / бета (ХГЧ)

    ХГЧ (хорионический гонадотропин человека) является членом семейства гликопротеиновых гормонов (GPH) в суперсемействе факторов роста цистиновых узлов (1‑5).Это гетеродимер уникальной субъединицы 23-32 кДа, CGb, с альфа-субъединицей 14-22 кДа, CGa (общий гликопротеиновый гормон альфа), который является общим с членами семейства GPH лутропином (ЛГ), фоллитропином (ФСГ) и стимулирует щитовидную железу. гормон (ТТГ) (1, 2). CGb встречается только у высших приматов, тогда как наиболее близкий гормон, LHb, экспрессируется у всех млекопитающих (6). CGb и LHb человека имеют общий рецептор, LH / CG ‑ R или LHR, и демонстрируют 86% идентичности аминокислотных последовательностей между аминокислотами 21 и 133, прежде чем переходить в 32 аминокислотные остатки, сильно O-гликозилированные (CGb) или 8 аминокислот (LHb) C ‑ Оконечный хвост (2). Зрелый человеческий CGa имеет 69% -73% идентичности с CGa собак, кроликов, крыс, мышей, коров, овец, свиней, кошек и лошадей. Каждая субъединица образует структуру цистинового узла с тремя дисульфидными мостиками (5). Петля «ремня безопасности» из CGb оборачивается вокруг CGa, стабилизируя нековалентную ассоциацию субъединиц и обеспечивая селективность рецептора (5). CGb кодируется шестью кластерами неаллельных генов, которые кодируют идентичные, но дифференциально экспрессируемые белки (2, 7). HGC, продуцируемый клетками цитотрофобласта на ранних сроках беременности, гипергликозилирован и сиалилирован, что увеличивает его кислотность и период полураспада (3, 4, 8).Формы с более низким гликозилированием продуцируются синцитиотрофобластами при продолжающейся беременности и в небольших количествах гипофизом, где он также сульфатирован (4, 8). Сообщается также о свободных, вариабельно гликозилированных субъединицах CGb (3, 4). Основная роль ХГЧ — действовать как аутокринный фактор для установления беременности и контроля роста и функции плаценты. Также было показано, что ХГЧ индуцирует ангиогенный фактор EG ‑ VEGF / PK1 и способствует иммунной привилегии за счет увеличения циркулирующих регуляторных Т-клеток и противовоспалительных цитокинов IL ‑ 10 и IL ‑ 27 посредством передачи сигналов цАМФ (9, 10).Помимо беременности, большое количество ХГЧ вырабатывается при гестационных трофобластических заболеваниях, таких как хориокарцинома и пузырный занос (3, 4). ХГЧ может также вырабатываться опухолями половых клеток яичников и яичек, а также дедифференцированными злокачественными новообразованиями (3, 4).

    1. Fiddes, J.C. and H.M. Гудман (1979) Nature 281 : 351.
    2. Policastro, P. et al. (1983) Дж.Биол. Chem. 258 : 11492.
    3. Stenman, U.H. et al. (2006) Human Reprod. Обновление 12 : 769.
    4. Коул, Л.А. (2012) Am. J. Cancer Res. 2 : 22.
    5. Лапторн, А.Дж. et al. (1994) Природа 369 : 455.
    6. Мастон, Г.А. и М. Руволо (2002), Мол. Биол. Evol. 19 : 320.
    7. Zimmerman, G. et al. (2012) Биол. Репрод. 86 : 1.
    8. Ковалевская, Г. et al. (2007) Мол. Клетка. Эндокринол. 260-262 : 237.
    9. Brouillet, S. et al. (2012) Ячейка. Мол. Life Sci. 69 : 1537.
    10. Koldehoff, M. et al. (2011) J. Leukoc. Биол. 90 : 1017.

    Идентификаторы Entrez Gene

    1082 (человек)

    Альтернативные имена

    Хориогонадотропин; Хорионический гонадотропин альфа / бета

    ХГЧ альфа-антитело Анти-ХГЧ альфа | Боковой поток ELISA

    ХГЧ альфа-антитело Анти-ХГЧ альфа | Боковой поток ELISA

    Эти веб-сайты используют файлы cookie. Продолжая просматривать сайт, вы соглашаетесь на использование файлов cookie.

    США ($) Соединенное Королевство (£) Европа (€)

      • Вы просматриваете магазин в США. Хотите пойти в магазин Europe?

    Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript.
    Вы должны включить JavaScript в вашем браузере, чтобы использовать функциональные возможности этого сайта.

    Мышиные моноклональные антитела к ХГЧ альфа

    Синонимы Моноклональное антитело к ХГЧ альфа, антитело против ХГЧ альфа, антитело к хорионическому гонадотропину альфа человека
    Перекрестная реактивность ХГЧ 100%, альфа-ХГЧ 485%, бета-ХГЧ 0,05%, ЛГ 95%, ТТГ 95%, ФСГ 95%.
    Приложения ELISA, боковой поток
    Иммуноген Антитела ХГЧ-альфа вырабатывались у мышей с использованием ХГЧ в качестве иммуногена.
    Информация об анализе Это антитело можно использовать в качестве покрывающего антитела с 10-1319 в качестве антитела-метки для обнаружения ХГЧ в комбинированном тесте моча / сыворотка.

    Технические характеристики

    Хост Мышь
    Клон M1709HCGa2
    Изотип IgG1
    Чистота > 95% чистоты
    Форма и буфер Поставляется в 50 мМ NaCl, 10 мМ PBS, pH 8.0, с 0,05% NaN3

    Хранение и безопасность

    Хранение Хранить при 2-8 ° C для кратковременного хранения. Для длительного хранения аликвотируйте и храните при -20 ° C, избегайте повторных циклов замораживания / оттаивания.

    Общая информация

    Биологическое значение Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) — это гликопротеиновый гормон, вырабатываемый во время беременности развивающимся эмбрионом после зачатия, а затем синцитиотрофобластом (частью плаценты). Он гетеродимерный, с альфа-субъединицей, идентичной субъединице лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), тиреотропного гормона (ТТГ) и бета-субъединицы, уникальной для ХГЧ.

    Список литературы

    Добавить бумагу

    Вы упомянули этот продукт?


    Извините, но на данный момент нет ссылок на этот продукт.

    Обзоры


    Вы должны войти в систему, чтобы написать отзыв.Пожалуйста авторизуйтесь здесь


    Извините, в настоящее время нет отзывов об этом продукте

    антител к ХГЧ | Мышиные поликлональные антитела против ХГЧ человека (клон CG04 + CG05)

    Название продукта

    ХГЧ, поликлональные антитела

    Только для исследовательских целей

    Только для исследовательского использования. Не использовать в диагностических процедурах.

    Форма / Формат

    ХГЧ представляет собой очищенную фракцию иммуноглобулина кроличьей антисыворотки, которую стерилизовали фильтрованием и разбавляли в буфере с pH 7. 5, содержащий БСА и азид натрия в качестве консерванта.

    Примечание о реакционной способности

    Парафин замороженный

    Подготовка и хранение

    Хранить при температуре от 2 до 8 ° C в темноте.

    Сертификат ISO

    Изготовлено в лаборатории, сертифицированной по стандарту ISO 13485: 2016.

    Прочие ноты

    Небольшие объемы флаконов с антителами к ХГЧ могут иногда попадать в пломбу флакона с продуктом во время транспортировки и хранения. При необходимости ненадолго отцентрифугируйте флакон на настольной центрифуге, чтобы удалить жидкость из крышки контейнера.Некоторые продукты могут потребовать доставки с сухим льдом, и может взиматься дополнительная плата за сухой лед.

    Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) представляет собой пептидный гормон, вырабатываемый во время беременности эмбрионом вскоре после зачатия, а затем синцитиотрофобластом. Его роль заключается в предотвращении распада желтого тела яичника и, таким образом, в поддержании выработки прогестерона, что имеет решающее значение для беременности у людей. ХГЧ может иметь дополнительные функции; например, считается, что он влияет на иммунную толерантность беременных.Раннее тестирование на беременность обычно основано на обнаружении или измерении ХГЧ. Антитело ХГЧ обнаруживает клетки и опухоли трофобластического происхождения, такие как хориокарциномы. Крупноклеточная карцинома и аденокарцинома легкого демонстрируют положительную реакцию на ХГЧ в 90% и 60% случаев соответственно. 20% плоскоклеточного рака легкого являются положительными на ХГЧ. Экспрессия ХГЧ нетрофобластными опухолями может указывать на агрессивное поведение, поскольку было обнаружено, что ХГЧ может играть роль в ответе хозяина на данную опухоль.

    Приведенные ниже данные NCBI / Uniprot описывают общую информацию о генах ХГЧ. Это не обязательно может быть применимо к этому продукту.

    NCBI Официальное полное имя

    Гемоцианин G цепь

    Меры предосторожности

    Все продукты MyBioSource предназначены для научных лабораторных исследований и не предназначены для диагностики, лечения, профилактики или использования in vivo. Совершая покупку, вы прямо заявляете и гарантируете MyBioSource, что вы будете надлежащим образом тестировать и использовать любые Продукты, приобретенные у MyBioSource, в соответствии с отраслевыми стандартами.MyBioSource и его уполномоченные дистрибьюторы оставляют за собой право отказать в обработке любого заказа, если мы обоснованно полагаем, что предполагаемое использование будет выходить за рамки наших приемлемых правил.

    Заявление об ограничении ответственности

    Несмотря на то, что были приложены все усилия для обеспечения точности информации, представленной в этом техническом описании, MyBioSource не несет ответственности за любые упущения или ошибки, содержащиеся в нем. MyBioSource оставляет за собой право вносить изменения в эту таблицу в любое время без предварительного уведомления.

    Заказчик обязан сообщать MyBioSource о проблемах с производительностью продукта в течение 30 дней с момента получения продукта. Пожалуйста, посетите нашу страницу с положениями и условиями для получения дополнительной информации.

    Продукты, связанные с антителами против ХГЧ
    Пути, связанные с антителом против ХГЧ
    Органы / ткани, связанные с антителом против ХГЧ

    Тесты на беременность | Энциклопедия проекта «Эмбрион»

    Тесты на беременность

    На протяжении всей истории болезни методы с использованием мочи были популярным способом тестирования на беременность.Ранние идеи варьировались от простого наблюдения за цветом мочи женщины до представления о том, что моча беременных женщин содержит особые кристаллы или выделения. Действительно, тестирование на беременность восходит к 1350 году до нашей эры в Древнем Египте. Письменный документ того времени описывает процесс, при котором женщина мочилась на семена пшеницы и ячменя в течение нескольких дней, и, в зависимости от того, какое растение росло, можно было определить статус беременности женщины и пол плода. В 1905 году британские физиологи
    Эрнест Старлинг и
    Уильям Бейлисс был первым, кто выделил специальные гормональные маркеры, обнаруженные в моче беременных женщин.

    Один специфический гормон, который сегодня используется для тестирования на беременность, — это
    хорионический гонадотропин человека, или ХГЧ. Этот гормон появляется в первом триместре беременности, когда происходит быстрое деление клеток и дифференцировка тканей в развивающемся эмбрионе. В
    бластоциста имплантируется через восемь-десять дней после овуляции и начинает секретировать ХГЧ, концентрация которого в моче удваивается каждые два-три дня на ранних сроках беременности. Гормон становится обнаруживаемым в крови и моче в течение семи-девяти дней, достигая максимальной концентрации примерно на восьмой неделе беременности.Благодаря своей ранней секреции, ХГЧ весьма полезен для выявления беременности. В частности, ХГЧ стимулирует желтое тело вырабатывать эстроген и прогестерон, которые жизненно важны для сохранения беременности. Желтое тело — это временная структура, которая развивается из фолликула яичника после овуляции.

    Хорионический гонадотропин человека был впервые обнаружен в 1920-х годах, когда немецкие ученые
    Сельмар Ашхайм и
    Бернхард Зондек заметил, что ХГЧ стимулирует развитие яичников у кроликов и мышей, а также влияет на формирование
    желтое тело у человека. Хорионический гонадотропин человека состоит из альфа-субъединицы и бета-субъединицы. Альфа-субъединица по составу аналогична
    фолликулостимулирующий гормон (ФСГ),
    лютеинизирующий гормон (ЛГ) и тиреотропный гормон (ТТГ). Однако бета-субъединица уникальна для ХГЧ, ее концевые двадцать восемь-тридцать аминокислот не встречаются ни в одном другом гликопротеиновом гормоне. Из-за его состава многие ранние тесты на беременность были в значительной степени неудачными из-за их неспособности отличить альфа-субъединицу от нескольких других часто встречающихся гормонов, не обязательно связанных с беременностью.

    В 1927 году Ашхайм и Зондек изобрели
    A-Z тест, специально разработанный для определения ХГЧ в моче. В этом тесте моча самки вводилась молодому
    мышь или
    крыса. Исходя из предположения, что ХГЧ оказывает такое же действие на мышей, как и на людей, если у животного произошла овуляция, это означает, что женщина была беременна. Биотесты, подобные тесту A-Z, получили широкое распространение в 1930-х годах, но их надежность была низкой, а их стоимость оставалась высокой.

    В 1960 году стал доступен тест на ингибирование гемагглютинации, иммуноанализ для определения беременности.Разработан
    Лейф Уайд и
    Карл Гемцелл, в этом тесте используется смесь антител к ХГЧ и мочи пациента. Тест считался положительным, если клетки скапливались в определенном порядке. Хотя тест был более эффективным, он все же не обладал чувствительностью. Иммуноанализ агглютинации в конечном итоге был заменен иммуноферментным анализом, который позволял обнаруживать ХГЧ в гораздо меньших концентрациях. В 1966 г.
    A. R. Midgeley представил радиоиммуноанализ на ХГЧ. Однако, несмотря на новую разработку, радиоиммуноанализ страдает той же проблемой, которая преследовала первые биоанализы и иммуноанализы — он не мог адекватно отличить альфа-субъединицу ХГЧ от других обычно встречающихся гормонов.Наконец, в 1972 г.
    Юдит Л. Вайтукайтис,
    Гленн Браунштейн и
    Грифф Росс разработал более сложный радиоиммуноанализ, позволяющий различать эти два вещества. Этот радиоиммуноанализ имел решающее значение, поскольку показал чувствительность к бета-субъединице ХГЧ и, таким образом, мог использоваться только через несколько дней после пропущенного менструального цикла. В 1976 году FDA одобрило использование иммуноанализа, первоначально использовавшегося для обнаружения опухолей, секретирующих ХГЧ, для использования в первом наборе для домашних тестов на беременность в Соединенных Штатах.

    Современные домашние тесты на беременность основаны на использовании антител в тесте, известном как сэндвич-тест. Термин «сэндвич-анализ» относится к анализу, в котором два антитела, захватывающее антитело и индикаторное антитело, объединяют антиген в форме молекулы ХГЧ. Домашний тест на беременность состоит из пластикового устройства, состоящего из трех частей: лунки для мочи, отверстия, в котором отображаются результаты теста, и экранированной пластиком области, содержащей индикаторные антитела. Если ХГЧ присутствует в моче, вылитой в мочу, он мигрирует и связывается с антителом-индикатором.Затем этот комплекс будет продолжать поступать к иммобилизованному захватному антителу, которое будет светиться, указывая на положительный тест на беременность.

    В целом, наборы для тестирования на беременность в домашних условиях чрезвычайно надежны и по состоянию на 2010 год могут точно определять уровни ХГЧ от 25 до 50 мМЕ / мл, когда уровень ХГЧ во время первого пропущенного периода составляет от 80 до 100 мМЕ / мл. У подавляющего большинства женщин яйцеклетка имплантируется (и, следовательно, выделяется гормон ХГЧ) к моменту первой пропущенной менструации, хотя этот процент увеличивается через неделю после пропущенной менструации.Обычно рекомендуется проводить домашние тесты на беременность примерно через десять дней после зачатия или, для женщин с нерегулярными менструальными циклами, через тридцать шесть дней после первого дня их последней менструации. Большинство наборов для домашних тестов инструктируют человека либо поместить тест-полоску непосредственно в струю мочи, либо окунуть палочку в чашку, содержащую образец мочи. Тест обычно занимает от одной до трех минут, чтобы получить наблюдаемый результат.

    Ложноотрицательные и ложноположительные результаты домашних тестов на беременность обычно связаны с человеческой ошибкой.Например, проведение теста слишком рано или слишком поздно приведет к ложноотрицательному результату, так как ХГЧ либо еще не секретируется, либо его уровень снизился. Использование загрязненного или разбавленного образца, удерживание неправильного конца тест-полоски и ожидание меньше необходимого времени — все это распространенные причины ложноотрицательных результатов. Распространенные причины ложноположительных результатов включают использование препаратов, содержащих ХГЧ, или использование теста после самопроизвольного аборта.

    Новые достижения в уменьшении количества человеческих ошибок при тестировании на беременность повысили надежность.Например, хотя положительные результаты домашних тестов классически обозначались появлением двойной синей линии, в 2003 году FDA одобрило цифровой тест на беременность Clearblue Easy, который дает цифровое значение «беременна» или «не беременна». на экране индикатора.

    Источники

    1. Коул, Лоуренс. «Тесты на хорионический гонадотропин человека». Экспертный обзор молекулярной диагностики 9 (2009): 721–47.
    2. Липсиц, Ребекка.«Тесты на беременность». Scientific American 283 (2000): 110–12.
    3. Пандей, Дикша, Пратап Кумар и Гаятри Чатурведи. «Хорионический гонадотропин человека:« Волшебная молекула »». Интернет-журнал эндрокринологии 5 (2009). http://www.ispub.com/journal/the_internet_journal_of_endocrinology/volume_5_number_1_43/article/human_chorionic_gonadotropin_the_magic_molecule.html.
    4. Пардалис, Дороти. «Домашние тесты на беременность чувствительны, но надежны». Аптечный пост (2003): 15.
    5. Садава, Дэвид, Крейг Хеллер, Гордон Орианс, Вильям Пурвес и Дэвид Хиллис. Жизнь: биологические науки . Нью-Йорк: У. Х. Фриман, 2006: 911–12.
    6. «История набора для тестов на беременность — Хронология тестирования на беременность». Управление истории, Национальные институты здравоохранения. http://history.nih.gov/exhibits/thinblueline/timeline.html (по состоянию на 20 февраля 2010 г.).
    7. Тон, Андреа. «Тонкая синяя линия: история набора для теста на беременность». Бюллетень истории медицины 81 (2007): 439–40.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *